果糖修饰壳聚糖微载体的制备及其原代大鼠肝细胞培养.pdfVIP

19 卷 1 期 Vol.19 No.1 2003 年 1月 ChineseJournal of Biotechnology January 2003 * 张立国 潘继伦 李结良 俞耀庭 (南开大学分子 物学研究所 物活性材料教育部重点实验室,天津 300071) 利用果糖修饰的壳聚糖为材料,液体石蜡作分散介质,戊二醛作交联剂, 通过反相悬浮法制备了性能优良 的微米级果糖修饰壳聚糖微载体。用其进行原代大鼠肝细胞培养, 利用相差显微镜和扫描电镜对细胞形态进行观 察,并测定了细胞的代谢活性。结果显示果糖修饰的壳聚糖微载体是一种优良的肝细胞培养支架。 果糖,壳聚糖, 微载体,肝细胞培养 O636.1,R967. 4 A 10002 3061(2003)012 01162 04 物人工肝支持系统是近年来发展起来的用于肝功能 1.2 衰竭治疗的体外肝功能支持装置。由于其功效优于其它人 在醋酸的催化下,果糖的羰基与壳聚糖的氨基发 加成 工肝支持系统,近年来相关的研究取得了长足进展[ 1- 2] 。 反应,形成Schiff碱。 物人工肝支持系统的核心问题是高活性、高密度肝细胞的培 RH2C= O+ CS2NH y RH2 C= N2 CS 2 [3- 4] 养。微载体培养是高密度培养动物细胞的有效方法 , 在 称取7.65g果糖加入到150 L 2. 5% 的壳聚糖乙酸溶液 物工程中得到了广泛应用。球形聚集体的培养是增加细 中,40e , 摇床反应 3d。取一定量的液体石蜡和适量司班 胞培养密度提高细胞活性的新技术,在聚集体培养中细胞间 80, 混合均匀后,加入到三口瓶中, 按4: 1的油水比加入适量 的相互作用对于维持肝细胞的功能是非常重要的,细胞的代 果糖修饰的壳聚糖溶液, 在37e 下充分搅拌至壳聚糖溶液 [5- 6] 谢活性比单层培养细胞有较大的提高 。聚集体中的肝 均匀分散成大小合适的液滴后, 加入一定体积 10% 的戊二 [6] 细胞形态和超微结构类似于细胞在体内的形态 。这种三 醛溶液,搅拌反应 1h 后加入适量6% NaOH 溶液, 调pH 至9 维结构的形成有助于提高细胞的特异性功能。 ~ 10, 继续反应2h, 过滤,充分洗涤, 得到壳聚糖微载体。 壳聚糖是近年来在 物医药、组织工程领域得到广泛应 1. 3 用的一种天然 物高分子,具有 物功能性、 物相容性、低