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实验十 DNA的限制性 内切酶酶切 一、实验目的 了解核酸限制性内切酶的特点及其对DNA的酶切过程 学会设计构建体外重组DNA分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及DNA的酶切技术 二、实验原理 EcoRI限制性内切酶的识别与切割顺序为： 5’……G↓AATTC……3’ 3’……CTTAA↑G……5’ Xhol I限制性内切酶的识别与切割顺序为： 5’……C↓TCGAG……3’ 3’……TAGCT↑C……5’ 三、实验材料 仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。 1.5ml离心管、移液枪枪头等。 DNA样品：上一个实验获得的质粒DNA 限制性内切酶Xhol I和EcoR I（Takara） 四、实验步骤 酶切体系： 质粒DNA 5ul EcoRⅠ 1ul Xhol Ⅰ 1ul 2×Buffer H 2ul Sw 11ul Total 20ul 用微量移液枪（20微升）依次吸取 SW 10倍酶切缓冲液 DNA EcoR I Xhol I 盖紧上述两个1.5ml离心管的盖子，在振荡器上充分混匀2秒钟，立即于离心机内离心一下，以将管壁上的液体集中于管底。 将离心管放置37℃水浴锅中反应3小时。在酶切反应的同时，制备1.0%的琼脂糖凝胶，并准备好电泳装置。 五、实验结果 根据电泳结果，描述酶切的结果与效果。 M 1 2 ←4900bp ←1518bp Analysis of recombinant expression vector with restriction enzyme M. DNA Marker(Lambda DNA/Hind III+EcoR I Markers) 1. pGEX 6p-1-hly/BamH I/Xho I 2. pGEX 6p-1 / EcoR I 重组质粒pGEX 6p-1-hly酶切结果 bp 19329 6223 1489 4254 2590 7743 1882 3472
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