胃疾病中幽门螺杆菌细胞毒相关基因A和E与白细胞介素一关性研究8相.pdfVIP

史虽药物与临床2003年8月第3卷第4期ChineseRemediesClinics，August2003，Vol3，No．4 ·339 · 胃疾病中幽门螺杆菌细胞毒相关基因A和 E 与 白细胞介素一8相关性研究 山西医科大学微生物与免疫学教研室(0300叭) 杨秀利 郝素珍 山 西 医科 大 学 第二 医院检 验科 刘培贤 幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori，Hp)是一种革兰染色 阴 收集上清液 ，作为模板 DNA。 性 ，呈弧形 、S型或海鸥状 的微需氧菌 ，专性定植于人 胃黏膜 标准菌株 NCTC11637作为参考菌株 ，其 DNA制备应 上皮表面。Hp普遍被认为是慢性 胃炎、胃溃疡 、胃癌及 胃黏 用酚一氯仿一异戊醇法 。 膜相关淋巴组织淋巴瘤的致病 因子 ，但其确切的致病机制尚 1．2．3 聚合酶链反应 (PCR)扩增和产物检测 ：引物设计均 未阐明。目前多数学者认为，Hp感染所致的 胃组织损伤程 参照文献[2，3]，由上海生工生物工程公司合成并纯化。引 度及临床症状 的严重程度同Hp菌株 的毒力相关 。细胞毒 物序列及扩增片段长度见表 1。PCR反应体积为 50 ，内含 相关基 因A(cytotoxinassociationgeneA，CagA)及 Cag毒力 模板 DNA、缓冲液 、四种脱氧三磷酸核苷 (dNTPs)、引物及 岛(fagpathogenicityi~and，CagPAI)是 目前 Hp致病机制研 TaqDNA聚合酶。PCR条件包括 95℃变性 5min，继 35个 究的热点。经典的观点认 为，CagA基 因阳性菌株诱导 胃黏 循环 。每一循环包 括 95℃变性 1min、50℃退火 1min、72 膜上皮细胞分泌 白细胞介素 (IL)．8，介 导强烈 的炎症反 ℃延伸 1min，终延伸 72℃5或 10min。PCR扩增产物 以 应…。然而近年来研究表 明CagPAI中的其他基 因在诱导 1．5％琼脂糖凝胶电泳 ，标准菌株作为 阳性对照 ，100V 电压 IL一8分泌中也起重要作用。本实验 旨在进一步探讨 CagPAI 电泳 25min后分析鉴定片段大小。 基因在致不同胃疾病 中的地位 。 表 1 用于UreA 、CagA及 CagE基因PCR检测的引物序列 1 资料与方法 ‘ 引物序列 扩增片段长度 1．1 临床资料 名称 bp 2001年5月至 9月就诊于山西 医科大学第一医院行 胃 UreA L：5-GCCAA1-(m AAATTA(I1、．3 411 镜检查的患者。就诊前 2周内未服抗生素、质子泵阻断剂及 R：5-C1 )CTTAA11、(rT1TTAC一3 黏膜保护剂 ，共 105例 ，男性 62例 ，女性 43例 ，年龄 18～76 岁 ，平均 47岁。经 胃镜观察及病理检测诊 断为慢性浅表性 L：5-TGCqAAATAGACAACT rGATCGA-3 289 胃炎 (CSG)28例 ，慢性萎缩性 胃炎 (CAG)25例 ，胃溃疡 Rt5-A A e A 、J、戏 (GU)33例 ，胃癌 (GC)19例。 CagE L：5-ATGGGGTG~ ACIAAC-3 335 1．2 方法 R：5-CATAACGGG1rCArr(AGAG 3 1．2．1 Hp培养及鉴定