犬血清弓形虫IgG抗体快速诊断金标试纸条研制.pdfVIP

犬血清弓形虫lgO抗体快速诊断金标试纸条的研制 摘 要 gondii)引起的以孕 弓形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxoplasma 妇(畜)流产、弱胎、畸胎、死胎和儿童(幼畜)生长受阻、死亡等为特征的一种 人畜共患病。该病广泛存在于世界各地，弓形虫宿主范围广泛，人和犬为其中间宿 主，都存在一定的感染率，据报道人的弓形虫感染与养犬存在一定关系。目前，国 内外学者已建立多种检测弓形虫抗原或抗体的方法，如病原学检测、间接血凝检测、 间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、PCR检测等，但这些方法操作较复杂、费 时长且需要一定的仪器设备，在临床推广应用中受到一定的限制。因此，建立一种 简易、快速、特异性强的检测方法，专用于犬弓形虫病的血清学诊断与流行病学调 查，不仅有助于了解犬感染情况，同时对于阻断弓形虫由犬向人的传播也有重要的 意义。 本研究用弓形虫速殖子腹腔感染昆明小鼠分别制备了弓形虫可溶性抗原和代谢 分泌抗原，并用制备的代谢分泌抗原免疫健康犬获得了犬弓形虫阳性血清；采集健 康犬的血清，用硫酸铵盐析法和葡聚糖G一200柱层析法纯化制得犬IgG，以其常规 免疫健康家兔，当双向琼脂扩散试验检测效价达到1：64以后收集兔血清，并经辛酸 ．硫酸铵盐析提纯制得兔抗犬lgG；用柠檬酸三钠还原法烧制直径为20nm的胶体金 颗粒，以胶体金颗粒标记兔抗犬IgG制作成金标垫，标记的最适PH值为9．0，lml 胶体金的最适标记量为12pg，将弓形虫可溶性抗原和羊抗兔IgG分别包被于硝酸纤 维素膜上做为检测线与质控线制成免疫层析试纸条。当犬血清中的弓形虫IgG抗体 与试纸条上的金标抗体(兔抗犬IgG)结合后沿着硝酸纤维素膜移动，在膜上的检 测线与质控线处发生特异性抗原抗体反应形成肉眼可见的红色线条。实验表明胶体 金试纸条最佳检测条件：弓形虫抗原的点膜浓度为2．5mg／ml，羊抗兔IgG点膜浓度 所研制的试纸条与兰州兽研所生产的弓形虫间接血凝试剂盒比较，同时检测从临床 病例中按随机抽样法采集的94份宠物犬血清，及6份感染犬血清。94份宠物犬血 清中，试纸条法检出3份，间接血凝试剂盒检出4份；6份感染犬血清中，试纸条 法检出4份，间接血凝试剂盒也检出4份，且这4份血清为相同血清，这表明两者 对感染犬血清检测符合率为100％。总检测结果表明：两法总符合率为99．O％ (99／100)，其中阳性和阴性符合率分别为87．5％(7／8)和98．9％(92／93)。 结论：本实验研制出的胶体金免疫层析试纸条和IRA试剂盒符合性好，检测犬 血清中的弓形虫IgG抗体重复性好、操作简便、快速，只需10一15min，不需特殊仪 器设备、结果客观准确，肉眼可判断，表明该法具有较好的犬血清弓形虫抗体诊断 价值。 关键词：犬；刚地弓形虫；胶体金；免疫层析法；IgG；间接血凝试验 Ⅲ 华中农业大学2008届顾}：毕业论文 Abstract caused isall zoonosis．Thedisease ToxoplasmosisbyToxoplasmagondii important cancause failurein womenand as animals，manifested reproductivepregnant puny, abnormal and is embryo，abortionstillbirths．Toxoplasmosisubiquitousamongpeople andanimals theworld．Humanand areit’S host．Itis throughout do