猪链球菌2型MRP与FBPS部分片段串联基因的原核表达.pdfVIP

一 37一 中国动物检疫 2009年第 26卷第 4期 猪链球菌 2型MRP与FBPS部分片段 串联基因的原核表达 王宝松 ’，单虎 ，曾巧英 ’，李明义 。 (1．甘肃农业大学，甘肃兰州 730080；2．青岛农业大学，山东青岛 266109； 3．青岛易邦生物工程有限公司，山东青岛 266032) 摘 要：根据猪链球菌2型 (SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)和纤维蛋白原结合蛋白(FBPS)的基 因序列，选取可能含 有抗原决定簇的两片段，各设计合成一对引物，使之含有共同的酶切位点 通过 T4DNA连接酶串联两片段，构建原核 表达载体 pET32a—mrp—fbps，重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)，经不同时间、不同温度，不同浓度 IPTG诱导表 达，经SDS—PAGE电泳，表达约为80kD的融合蛋白。Westernblot结果表明重组蛋白可被 SS2阳性血清所识别。证实 串联表达的融合蛋白具有 良好的免疫原性，是重要的保护性抗原，本试验为进一步研究猪链球菌亚单位疫苗奠定了 基础 。 关键词：猪链球菌2型；溶菌酶释放蛋白；纤维蛋白原结合蛋白；串联表达 中图分类号：$852．611 文献标识码：A 文章编号：1005—944X(2009)04—0037—03 Clom gandExpression ofal~l$ionProtein ofmmaaddase-reloasedprotein andfibromx,tin andfibrinog~-bindingprotein ofStmptoooooussuistype2 WangBao—song，ShanHu，ZengQiao-ying，LiMing—yi (1．GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730080；2．QingdaoAgriculturalUniversiyt，Qingdao266109；3．Qingdao YebioBioengineeringCo．，Ltd．，Qingdao266032) Ah由翻陡 Accordingto thegenesequenceofStreptococcussuistype 2 muramidase-released protein(NⅡ ) andfibronectinnadfibrinogen—bindingprotein (FBPS)，two fragmentsprobably containingepitopeswereselected， and apairofprimershaving common restriction sitesweredesigned．Thewt o rfamg entswere linked to construct hte prokaryotic expression vectorpET32a-rmp-fops．And hte re—assembled plasmid was hten transferred into E． coliBL21 (DE3)．SDS—PAGE electrophoresisrevealedhtatabout80kD fusion protein wasexpressedthrough in- duced expression，for differenttime，and at differenttemperature nad concentration．The Western blot result demonstrated thathte recombniantproteni can be reco~ ized by SS2 positive serunl and fusion protein in series expression isa sortofimportantprotectiveantigen．Tl1isexperimentprovidedhte foundation ofrfurtherresearch ofswnie srteptococcussubunitvaccine． K眄 硼抓l暑：S