高效液相色谱法测含蛋白类样品中叶酸含量.pdfVIP

浙江省医学科学院学报 2009年6月(总第 77期) · 29 · 高效液相色谱法测含蛋白类样品中叶酸含量 李跃中 唐靓 王晗 叶酸是一种重要的B族维生素 ，与许 lOmin取上清液 ，临用前现配)2mL于37℃下 多重要 的生化过程密切相关 。美 国 1998年 水解 1613。将样 品溶液置于 3000rpm下离心 1月 1日起 已强制规定在某些谷物食 品中 10min，取上清液经0．451xm的滤膜过滤后取 强化叶酸 。许多研究证实叶酸与新生儿缺 201zL进样 。 陷、成年与老年心血管病 、精神科疾病 、胃 1．3色谱条件 肠功能异常、免疫学缺陷及肿瘤等具有相 色谱柱：Phenomenex—C18ODS柱 (4．6mm 关性 。叶酸广泛存在于各种动植物食品中， x250mm，5m)；检测波长 ：入=280nm；柱温 ： 除了天然存在 以外 ，也作为添加剂被适量 40oC；流速 ：1．0mL／min；进样量 2O g；流动 加入到一些营养强化食 品、保健食 品中，因 相2[]：甲醇、磷酸二氢钾 、氢氧化钾水溶液(称 此准确测定叶酸含量对产 品的生产加工 、 取6．8g磷酸二氢钾加入 0．1mol／L氢氧化钾 功效评价等有重要意义 。本文报道高效液 溶液70mL，加水稀释至850mL，并调节 pH 相色谱法测定含蛋 白类样 品中的叶酸含量 至 6．3，加甲醇 80mL后用水定容至 1000mE)。 的应用研 究工作 ，以便建立一个适用于含 1．4标准曲线 蛋 白类样 品中叶酸定量检测 的快速、准确 分别 吸取 0．05、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0 的方法。 mL标准储备液于 lOmL容量瓶中，用 0．5％ 1 材料与方法 的氨水溶液定容至刻度。此时标准使用液浓 1．1仪器与试剂 度分别相 当于 0．5、1、2、4…68lOixg／mL。各 德国戴安 P680高效液相色谱仪 ；在分析 取20lxL进样 。 中所用的水均为高纯水 ；甲醇为优级纯 ；O．5％ 2 结果 的氨水溶液；氢氧化钾和磷酸二氢钠(分析纯)； 结果见表 1。 ． 标准储备液 ：称取 O．Olg叶酸对照品于 lOOmL 2．1线性关系 容量瓶中，用 0．5％的氨水定容至刻度 ，此溶液 在本方法所确定 的实验条件下进行测 浓度为 lO01xg／mL；叶酸对照品(浙江省药检所 定，在 O．5-10tzg范围内叶酸浓度与峰面积具 提供)；蛋 白酶 (Sigma公司)。磷酸缓冲液(I)B 有良好的线性关系y=13．61x+7．13，相关系数 0．05mol／L，pH6．8，含 1％维生素C)。 为0．9961。分析样品时应根据可预知的含量 1．2样品处理 【1及测定 确定合适取样量 ，以确保测试液含量在最佳 猪肝切片烘干后打粉备用 ，称取一定量 线性范围内。 样 品，加 PB5OmL，于 121oC高压水解 15rain。 2．2重复性试验 加蛋 白酶 (称取干燥蛋 白酶 200mg加入 精称 5g样品6份于 5OraL量瓶 中，按照 2OraL磷