棉铃虫乙酰胆碱酯酶cDNA片段的克隆和序列分析3.pdfVIP

动物学报 　48 ( 1) :121～124 , 2002 A cta Zoologica S inica 　　　　　 　 研究简报 Notes 棉铃虫乙酰胆碱酯酶 cD NA 片段的克隆 和序列分析 任晓霞　韩召军　王荫长 (南京农业大学农业部病虫监测与治理基础实验室 , 南京 210095) 关键词 　棉铃虫 　RTPCR 　乙酰胆碱酯酶基因 　cDNA 克隆 　序列分析 　　乙酰胆碱酯酶 ( acetylcholinesterase , AChE , 合 成 , PCR 扩 增 仪 为 Hybaid Omnigene ) ( ) EC 3 117 能够迅速水解兴奋性神经递质乙酰 Thermocycler 英国 。 胆碱而保持神经突触传递的正常功能 , 是有机磷和 13 　总 RNA 提取 氨基甲酸酯类杀虫剂的重要作用靶标 ( Hama et 用盐酸胍法从棉铃虫幼虫中提取总 RNA al . , 1983 ; Fournier et al . , 1994) 。在昆虫和其它 (Chomezynski et al . , 1987) 。棉铃虫幼虫经饥饿 节肢动物中 , 变构 AChE 导致了杀虫剂抗性的增加 处理 24 h 后 , 取单头四龄初期幼虫于 Eppendorf 管 (Oppenoorth et al . , 1985) , 使 AChE 的毒理学研 μ 中 , 以液氮研磨后, 加入 100 l 盐酸胍抽提缓冲 究更加具有意义。棉铃虫 [ Helicoverpa armigera 液 ( 8 mol/ L guanidiniumHCl , 20 mmol/ L MOPs , ( Hübner) ] 是世界最重要的农业害虫之一 , 而关 20 mmol/ L ED TA) , 再加入等体积的酚氯仿混合 于棉铃虫乙酰胆碱酯酶基因克隆和序列分析迄今为 液 , 颠倒混匀 , 重复 3～4 次 , 最后加入 02 体积 止在国内外还均未见报道 , 这一点严重阻碍了对棉 乙酸和07 体积无水乙醇 , - 20 ℃进行沉淀 , 沉淀 铃虫乙酰胆碱酯酶与杀虫剂分子之间互作关系的进 物以 75 % 乙醇洗涤后 , 溶于 SDW ( sterile and 一步研究。本文利用反转录多聚酶链式反应 ( RT ) ( ) distilled water 中 A260/ 280 = 1 8 , 待用。 PCR) 技术对棉铃虫乙酰胆碱酯酶基因 cDNA 片段 14 　第一链 cD NA 合成 进行克隆和序列分析 , 为获取棉铃虫乙酰胆碱酯酶 μ 取一 Eppendorf 管 , 依次加入 1 ～ 2 g 总 基因全序列以及研究其变构乙酰胆碱酯酶的分子机 RNA , 2 μ ( μ ) l