叠氮钠对ELIsA影响私I5／.pdfVIP

维普资讯 口一 缸 40 南京医科太学学报 1995年第 15卷第 1期 叠氮钠对 ELIsA 影响 私I5 ／ 生物化学教研宴 潘芝芳 徐 桦 刘 讲 一 — — 、 J 摘 要 在抗原、抗体和酶标记抗体中加入不同量的叠氮钠 (NN)，用不加N 的组作对 照，观察 NaN，在酶标记免疫吸附测定法 (EL1SA)中的影响，用斜率比值法计算相对抑制率 ，经两 标本直线回归方程比较 ，用 t检验 ，结果证 明NaN；对酶标记抗体的伸{目I作 用最强 ，言O．O2 NaN ． 的酶标记抗体即丧失 47．9％的活性 (POoO1)；其次是对抗原的抑制作 用，言 01 NaN 时抗原 活性艘抑制 18．3 (O．0SP0．02){而 0．2 NaNa对包被包抗体活性无 明显的影响 (尸0．5)。 关键调 叠氮钠 I酶标记抗体 ；抗原f抗体 中厢号 R392．1 叠氮钠 (NaN )是实验室中常用的防腐 标记抗体应用前经滴度测定后稀释到合适浓 剂 ，因此作ELISA是否应用NaN ，各家意见 度(约 1：1000)，稀释液的成份为：牛血清 白 不一 。由于 NaN 抑制过氧化物酶的活性 ，所 蛋白(2 )、NaCI(0．9 )和柠檬酸钠 (IM)。 以在辣根过氧化酶标记抗体 中不能加 NaN (4)缓冲洗液 ：KHPO 1．22克 、KHPO． 作为防腐剂．有的学者对ELISA 中的试剂一 0。408克、NaCI8．77克加 HO 至 1升 。用 概 禁 用 NaN，；也有 文 献 报 遭 既 用 NaN 4M NaOH调至 pH7．4，加 0．1毫升吐温 2O。 (O．1％～0．2％)作为抗原 的防腐 剂、又用 (5)色素原一底物液：邻苯二胺 lO毫克溶 NaN (1％)作为最后终止反应 】。本实验是 于0．1M pH6．0磷酸盐一柠檬酸缓冲液 30毫 用 ELISA测定人脾铁蛋 白，用 不同浓度的 升中，临用前加 5微升 3O Ho：。 NaN，分别加入包被抗体 、抗原和 酶标记抗 (6)抗原稀释剂 ：NaCl9克，柠檬酸三钠 体中以观察对实验结果的影响。 2HO25．88克加水至 1升 。 (7)4M硫酸 。 1 材料与方法 (8)ELISA检测仪 (南京华东电子管厂 1．1 材料 生产)。 (1)人脾铁蛋 白：外伤后手术摘除的人新 (9)聚 乙稀 40孔微孔塑料板 (上海塑料 鲜脾脏 ，用改 良Granick法制得高纯度的人 三厂产品)。 脾铁蛋白。应用液浓度为 108．5ng／ml，再作 1．2 方法 倍 比稀释 。 在微孔塑料板中加 5O微升稀释的免抗 (2)免抗人脾铁蛋白血清 ：自制，应用时 铁蛋 白 ，4C过夜 ，倒空甩干，加缓冲洗液 按滴度稀释到合适的浓度。 至孔满，倒空甩干，重复洗三次。 稀释液 ：pH9．6的碳酸缓冲液 (含碳 酸 加 50微升不同含量 (108．5；54．3；27．1} 钠 0．015M 及碳酸氢钠 035M)。 13．6；6．8和 3．4ng／m1)抗原 (双份)于相应 (3)酶标记抗体：自翩 ，辣根过氧化物酶 孔中，室温 3O分钟，用缓冲液洗