甘油三酯酶法测定试剂盒.docVIP

甘油三酯酶法测定试剂盒 Triglyceride GPO-POD assay kit 货号：M100013 描述：甘油三酯由甘油与脂肪酸酯化物，是血脂的主要组成部分，是机体重要的供能物质。食物中的甘油三酯在肠道经胰脂酶消化分解，吸收后重新酯化为甘油三酯，经淋巴系统进入血液。肝脏是合成甘油三酯的主要场所，脂肪组织是最大的甘油三酯储存库。高甘油三酯和高胆固醇血症是临床最常见的高脂血症，已证实与动脉粥样硬化、心肌梗死、脑中风、高血压、糖尿病、肥胖等多种疾病有关。在病理条件下，各种组织细胞合成和储集的甘油三酯显著增加。定量检测血液和组织细胞中甘油三酯含量，是临床、临床基础、基础医学生物学研究常用的生化指标。 试剂盒采用经典GPO Trinder酶学反应测定甘油三酯含量，该方法符合世界卫生组织(WHO)、美国FDA、中国《全国临床检验操作规程》规定的甘油三酯临床检验标准，改进后特别适于组织细胞甘油三酯检测。 测定原理：(1) 脂肪酶分解血清中甘油三酯为甘油与脂肪酸。(2) 在ATP存在下，甘油激酶将甘油磷酸化生成3-磷酸甘油。(3) 后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢。(4) 过氧化氢与过氧化物酶、4-氨基比林进行显色反应，生成有色苯醌亚胺，在500 nm (480~550 nm)处吸光度值与甘油三酯浓度成正比。 用途：测定血清、血浆、组织细胞中甘油三酯含量。 组成 (250次微板测定或125次1 ml比色杯测定) (1) 工作液I 50 ml，?20oC或4oC避光1年。 (2) 工作液II 18 ml，?20oC或4oC避光1年。 (3) 4 mM三油酸甘油酯标准品1 ml，4 oC储存2年切勿冻存以免浑浊。 所需设备：721、722型可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。工作波长480-550 nm之间。 样本处理 血液：新鲜血液4oC 2000 g离心5 min得到血浆，非抗凝血4oC放置2小时得到血清。血浆或血清可直接测定。如超过线性，可用蒸馏水或生理盐水1:1～1:5稀释后测定。 原代成熟脂肪细胞：用37oC预热PBS pH 7.0洗涤细胞1-2次去除释放的甘油。每100 μl 压积 (packed cell volume, PCV)脂肪细胞加入1 ml PBS缓冲液。管壁上可能粘附有细胞受损释放的甘油三酯 (油滴)，因此须避开油滴，将细胞悬液转移到新的1.5 ml离心管。超声破碎，功率200W，3秒×3次。净置5分钟。取10μl乳浊状的细胞超声裂解液加入990 μl PBS，振荡混匀，待测。 分化脂肪细胞或非脂肪细胞：PBS洗涤细胞2次去除细胞释放的甘油，每5－10 x 106个细胞加1 ml PBS。超声破碎，功率200W，3秒×3次。将细胞裂解液转移到1.5 ml离心管，净置5分钟。待测。 标准品稀释：4 mM 三油酸甘油酯标准品用蒸馏水或与样本缓冲液一致的液体倍比稀释为2000、1000、500、250、125、62.5 μM，4oC保存。若变浑浊或测定失去线性应重新配制。 甘油三酯测定 参见下面的表1加样，取标准甘油或待测样品先与工作液I混合，混匀后室温静置10~15min或37oC 5min后再加入工作液II，25oC室温反应30 min或37oC 10min达到平衡。反应达到平衡后颜色在60 min内稳定。 空白管调零，测定OD值，波长480-550 nm。比色杯光径1 cm。 绘制标准曲线并计算甘油三酯浓度。 表1 加样比例 (检测范围100－12000 μmol/L) 微板测定 1 ml比色杯测定 空白 标准 样本 空白 标准 样本 蒸馏水 10 μl 10 μl 标准溶液 10 μl 10 μl 样品溶液 10 μl 10 μl 工作液I 200 μl 200 μl 200 μl 400 μl 400 μl 400 μl 混匀后室温静置10~15min或37oC5min 工作液II 70μl 70μl 70μl 130μl 130μl 130μl 说明 单位换算：甘油三酯mmol/L×38.7=甘油三酯mg/dl。 中国正常人血清甘油三酯范围0.7-1.7mmol/L (62-150mg/dl)，建议各实验室建立自己的正常值范围。 维生素C0.18g/L、血红蛋白2g/L、胆红素0.25g/L、强还原剂如二硫苏糖醇、巯基乙醇等均干扰测试。EDTA与肝素在抗凝用量时不干扰测定。 中国正常人血清甘油浓度约为0.11mmol/L (10mg/dl)，本试剂盒采用中华医学会检验分会推荐的“两步法”测定，有效的去除了血清等样本中的游离甘油。 当试剂混浊、出现红色或在波长500nm处，以蒸馏水为空白吸光度大于0.2，则不能用。 标本存放中会有少