鸡志贺氏菌ESBLs的基因型检测及其感染的实验性治疗.pdf

摘 要 本文采用试管二倍稀释法对临床分离的鸡志贺氏菌常用抗菌药的MIC值测定，利用双纸 片增效法对其所产超广谱13一内酰胺酶(ESBLs)的检测，并用PCR方法确定其基冈型。试制 出复方头孢噻呋混悬液，并观察了其对人工复制的产B一内酰胺酶忐贺氏菌感染治疗效果， 以了解鸡志贺氏菌的耐药现状及耐药机制，探讨其产酶耐药的分子机制，为临床治疗提供理 论依据，同时为新兽药制剂的开发提供新的思路。 13一内酰胺酶检测及ESBLs的试验结果表明：临床分离的鸡志贺氏菌用特异性的色原头 孢菌素法检测呈B一内酰胺酶阳性，AmpC酶为阴性。双纸片增效法检测到超广谱B一内酰胺 酶，对临床志贺氏菌所产ESBLs设计引物PCR扩增、克隆、测序，利用DnastarMegAlign 型，共有七处碱基发生变化，相应引起三个氨基酸发生改变，33位D(天冬氨酸)变为G 胺)，与其它序列相比，AY903309(TEM．116)同源性最高，为99．8％，共两处碱基发生 变化，其中151位碱基A变为G，引起51位丝氨酸变为甘氨酸，403位碱基T变为C，没 有引起氨基酸变化，为沉默突变，因与TEM—116有一个氨基酸差异，故该基因型暂称其为 1973。 新型TEM—lV，上传至GenBank获序列号DQ21 体外抑菌实验结果表明：临床产ESBLs志贺氏菌对大部分单方药物敏感性明显下降，除 碳青酶烯类亚胺培南、美罗培南敏感性较高，MIC值分别为0．25p∥ml、0．06251．tg／ml；其 它单药都相对不敏感，第三代头孢类头孢噻呋、头孢曲松对其MIC值分别为12899／ml、 制剂可显著增强B．内酰胺类抗菌药的对产酶菌抗菌活性，头孢噻呋／他唑巴坦(2：1)、头孢 ml，提示对产酶菌感染疾病治疗时使用三代头孢类抗生素与抑制剂联用效果较好。 本文还研究了复方头孢噻呋油性混悬注射液处方、物理稳定性和对临床产超广谱B．内 酰胺酶(ESBLs)鸡志贺氏菌感染的疗效。根据ESBLs基因型为TEM型及药敏试验确定头 la 孢噻呋和他唑巴坦联用(2：1)对产ESBLs的鸡忐贺氏菌较为敏感，MIC值为16 g／ml， g／m1)的1／8；用此为主药处方和辅料羧甲基纤维素钠O．2％、 是头孢噻呋MIC值(1289la 司本--801．2％制备的复方头孢噻呋油性混悬液其沉降比为0．997、再分散性良好，经过在温 度为60℃、湿度为75％环境下加速试验6个月后观察，颜色无变化，无粘壁现象，无颗粒 凝结，表明物理稳定性良好；该制剂按20mg／Kg体重肌肉注射一次，对产ESBLs鸡志贺氏 菌感染的有效率90％，治愈率86％。 关键词：志贺氏菌超广谱B一内酰胺酶基因型混悬液 治疗试验 DetectionofESBLs fromchickenand producedbyshigeila genetype itsinfection tentativetreatmentsof isor：Prof．Hu Superv Gongzheng MasterCandidate：Si Hong—bin ABSTRACTMICofcommonantibiotics isolatedfromchicken againstshigella weredeterminedtheameliorativetwofolddilution ESBLs