慢病毒载体法在制备转基因小鼠模型中的应用.pdfVIP

临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol 20090ct；25(5) ·527 · 慢病毒载体法在制备转基因小鼠模型中的应用 于莉娜，张庆玲，丁彦青 摘要：目的 改进慢病毒载体法制备转基因小鼠的操作技术 ，分别从病毒浓缩、受精卵显微注射进针点和如何提高病毒注射 效率等方面探讨慢病毒显微注射技术的最佳方案。方法 超速离心获得浓缩慢病毒，通过卵周隙显微注射技术感染小鼠受 精卵，比较不同注射点显微注射后受精卵存活率及发育情况。结果 受精卵 1点和5点作为注射点的卵周隙注射组可有效避 免注射针与卵膜的直接碰触，减少对受精卵的损伤 ，胚胎存活率较常规中轴 3点作为注射点组显著提高 (P0．01)。适当的 病毒滴度和注入量、操作细节、注射针 口径等均可影响注射后受精卵存活率和感染率。结论 卵周隙显微注射过程中选择适 当的注射点以及部分操作的改进，可显著提高受精卵的存活率，为提高转基因小鼠模型的制备效率提供参考。 关键词：慢病毒载体；卵周隙注射；转基因鼠 中图分类号：R322 文献标识码：A 文章编号：1001—7399(2009)05—0527—04 Application oflentiviralvectorsin establishmentoftransgenicmicemodels YULi—Ha，ZHANGQing—ling，DINGYa—qing (DepartmentofPathologyandGuangdongProvincialKeyLaboratoryofMolecularTumorPathology，KeyLaboratoryofTranscriptome and ProteomeforHumanMajorDiseasessupportedbytheMinsitryofEducationandGuangdongPrvoince，NanfangHospital，Southern Medical￡，n西e ，Guangzhou 510515，China) Abstract：Purpose Toimprovetheskillsofsubzonalinjectionbylentiviralvectorsandtofindthemostsuitablewayoflentiviralmi— croinjectionintermsoflentivirusesconcentration，injectionpointandefficiency．Methods Highconcentratedlentiviruseswereharves— tedbyuhracentrifugation．Thelentiviruseswereintroducedintofertilizedeggsbypushingthemicropipettetipthroughthezonalayerin— totheperivitellinespace．Thesurvivalratesoffertilizedeggswereanalyzedandcomparedafterinjectedthroughthreedifferentpoints． Results Thesurvivalratesofmanipulatedeggsweresignificantlyincreasedthroughthe1and3pointsinjectioncomparedwithcentral axis3pointsinjection(P0．01)，whichavoidedhamr ingtheembryocellmembrane．Lentivirustiter，manipulationandmicropipette weretheinfluencingfactorsinthisoperation．Conclusions Thesuitableinjectionpointandimprovedmanipulationinperivitelline spacemicroinjectioncansignificantlyincreasethesurvivalrateoffertilizedeggsandpromotetheefficiencyofestablishingtransgenie micebylendviralvectors． Keywords：lentiviralvector；subzonalinjection；transgenicmouse 将外源基因导入动物体内并进行稳定表达已成