庆大霉素脂质体同种异体骨的制备及体外抑制金黄色葡萄球菌生物膜的研究.pdfVIP

筮互屋全国蟹剖皇蝤庄(置整童壁)堂盔堑过会暨噩三届厶王差苴壶丝!金堡：全国差苴之E登迨痘堑迸星缝塾堡 庆大霉素脂质体同种异体骨的制备及体外抑制 金黄色葡萄球菌生物膜的研究 唐辉徐永清李刚 游永刚 陆华拓李军 丁晶 成都军区昆明总医院骨科云南昆明650032 【摘要】 目的：由于细菌生物膜常在骨内固定物、死骨滋生，导致难以根除的骨组织慢性感染。本研究旨在制 备一种新的抗生素缓释系统，为金黄色葡萄球菌生物膜感染的治疗提供新思路。方法：制备庆大霉素阳离子脂质 体及兔同种异体骨，并采用低温真空负压吸引法将二者复合，制备成庆大霉素脂质体同种异体骨，并行阳离子脂质 体抗生素释放试验。构建金黄色葡萄球菌生物膜模型，于体外探讨由庆大霉素脂质体同种异体骨中释放出的阳离 子脂质体庆大霉素对细菌生物膜的抑制作用。结果：成功制备庆大霉素脂质体同种异体骨，可持续释放庆大霉素 脂质体达12天，前3天释放具有爆发效应，所释放的庆大霉素脂质体对金黄色葡萄球菌生物膜生长的抑制作用与 新制备的庆大霉素脂质体相似，二者均明显高于单独使用庆大霉素。结论：低温真空负压吸引法制备庆大霉素脂 质体同种异体骨并不影响所释放的庆大霉素脂质体的抗菌作用，在体外具有高效抑制金黄色葡萄球菌生物膜的作 用，且在低浓度更为明显。 【关键词】 阳离子脂质体；细菌生物膜；骨髓炎；同种异体骨 慢性骨髓炎是一种细菌生物膜感染【1J。由于细菌生物膜对抗生素的渗透具有阻止作用，且生物膜底层 细菌因特殊的内部微生态环境而生长缓慢，对抗生素不敏感【2】，因而对抗生素较浮游细菌更为耐药。研究 表明，青霉素G对金黄色葡萄球菌生物膜的最低抑菌浓度(minimuminhibitory 菌的5000倍睁J。一旦细菌生物膜在骨内固定、死骨或周围组织滋生，往往因感染灶难以根除而导致长期慢 性感染，给患者带来极大痛苦。近年来使用的PMMA、Osteoset T在局部缓释抗生素，提高了骨髓炎的治疗 率，但PMMA需二次手术取出，同时有研究表明单纯清创与清创后植入OsteosetT在骨髓炎的治愈率方面无 明显差异HJ。此外，目前有研究证实，一些高浓度抗生素，如庆大霉素可抑制人成骨细胞和内皮细胞的增 殖，从而影响骨折愈合”J。 脂质体已广泛用于抗生素、抗肿瘤药物载体，具有天然原料合成、可降解、无毒等优点[6】，已用于负载各 类抗生素口1。研究证实，阳离子脂质体包裹的万古霉素可有效地靶向金黄色葡萄球菌生物膜哺】。因此，脂 质体是一种有效的抗生素缓释载体，可显著增加细菌生物膜周围的抗生素浓度，并降低抗生素毒性【9J。然 而人体网状内皮系统中的肝脏枯否细胞及脾脏巨噬细胞对静脉注射的脂质体抗生素具有很强的清除作 用【10I，大大降低了抗生素到达骨组织感染灶的浓度。 本研究旨在建立负载庆大霉素脂质体的同种异体骨，并且检测其释放的庆大霉素脂质体对金黄色葡萄 球菌生物膜的抑制作用。 l材料与方法 1．1细菌 单菌落置于液体培养基中于37℃培养18h后以2000rpm离心15分钟，弃去上清，以PBS重新制成悬液。重 复3次。最后在550nto将细菌吸光度值调配至0。1。 1．2金黄色葡萄球菌生物膜微孔板模型的构建 96孑L平底微孔板中，室温培养过夜，黄色葡萄球菌生物膜即可在微孔板底部形成，使用前以PBS冲洗。 1．3 阳离子脂质体及同种异体骨的制备 1．3．1 0．49：0．43混合于圆底烧瓶中，并于40。C真空旋转蒸干器中制成脂质膜。然后加入6ml浓度为20mg／1lll的 庆大霉素溶液，并于55。C振荡1h制成脂质悬液，于冰浴中超声处理40s后于4℃60000 g离心lh去除上清 197 筮五厘全国蟹创皇!堕鏖(置昼童堑2堂苤巫过金暨筮三厦厶王羞笪直玺逾拯：全国差苴处叠渔痖堑进屋鳖邀班 中尚未包被的庆大霉素，沉淀以6ml双蒸水重悬即制成庆大霉素脂质体，并于4。C保存，1周内用完。包封率 =(加入庆大霉素量一未包封庆大霉素量)／加入庆大霉素量。