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热休克蛋白90在糖皮质激素抵抗中的作用研究 欧阳涓姜傥 (中山大学附属第一医院检验医学部，肾内科广东广州510080) 【摘要】目的糖皮质激素(GC)是治疗原发性肾病综合征(INS)的一线用药，然而部分 INS患者出现对激素治疗的抵抗严重影响了药物的疗效和病人的预后。GC发挥效应是通过 糖皮质激素受体(GR)介导，热休克蛋白90(HSP90)是GR的重要伴侣蛋白。本研究着 重研究HsP90在糖皮质激素反应性中的作用，以期揭示HSP90在INS发生和糖皮质激素治 疗效应发挥中的作用本质，这对于阐明免疫损伤性疾病的发病机制，指导临床进行正确施治 具有重要意义。方法通过培养GC敏感细胞株C7H2和采用HSP90特异性阻滞剂来研究 HSP90对激素反应性的影响：并且采用逆转录一聚合酶链反应的方法和激光共聚焦免疫荧光 平及HSP90的亚细胞分布。结果体外培养发现HSP90阻断剂能够显著阻断GC诱导C7H2 mRNA 凋亡(91．8％vs18．6％P0．01)。而体内研究发现与健康对照组比较，INS患者HSP90 mRNA表达显著高于激素敏 表达水平明显增高(尸o．05)：而且激素抵抗组INS患者HSP90 感组INS患者((P0．05)。而各组INS患者与健康对照者GRmRNA表达无明显差异(尸O．05)。 此外分析发现INS患者的HSP90／GR比值也明显高于健康对照组(PO．05)。进一步比较激 素敏感组INS患者和激素抵抗组INS患者PBMC中HSP90亚细胞分布状况，发现健康对照 组的HSP90主要分布在细胞浆中，核内仅有微量分布；INS患者的HSP90表达有所增加， 并且激素抵抗组与敏感组比较，HSP90明显趋向细胞核内分布(尸O．01)。结论阻断HSP90 后，GC诱导C7H2凋亡减少，说明HSP90在GC效应发挥中有着重要作用。INS患者外周 血单个核细胞中HSP90的表达增高；并且激素抵抗型的INS患者HSP90的表达高于激素敏 感型的INS患者，而且在细胞核内分布明显增加，呈现向细胞核转移的分布模式。这些发 现提示HSP90的异常表达及亚细胞分布变化可能是导致内源性、外源性糖皮质激素抵抗的 重要机制，其一方面通过影响糖皮质激素对免疫系统的自身反馈调节，参与INS等免疫损 伤性疾病的发病；另一方面则可能干预患者对外源性激素的治疗反应，影响临床疗效。 【关键词】热休克蛋白90：分子伴侣：类固醇激素：受体：格尔得霉素 原发性肾病综合征(INS)是一种临床常见的免疫损伤性疾病。目前，对INS患者的治 疗主要以糖皮质激素(GC)为首选，INS患者的预后及疾病转归很大程度上取决于患者对 ．．285． 激素的反应性。对于GC抵抗型患者，即使加大临床GC用量，也并不能改善其症状和预后， 反而易导致因大剂量GC使用而引起种种副作用的产生。我们既往研究‘11尚发现GC抵抗也 可能影响其对自身免疫系统的调节，从而成为免疫性损伤的重要发病机制。因此，极有必要 对GC抵抗的机制进行深入探讨。 GC发挥效应要通过其受体．即糖皮质激素受体(GR)。热休克蛋白90(HSP90)作为 GR的伴侣蛋白，它主要分布在细胞浆中。本文对HSP90在GC效应发挥中所起的作用，以 及在不同GC反应性患者中HSP90的表达、分布及与GR受体的关系进行研究，籍以评价 HSP90在GC反应性中所起的重要作用。 1．材料与方法 1．1研究对象： C7H2细胞为激素敏感的淋巴细胞系细胞株，由澳州Tyrolean研究所Kofler教授馈赠。 外周血单个核细胞(PBMc)来自INS组：中山大学附属第一医院。肾内科住院的INS患者 规标准激素疗程。根据患者对GC反应性，将患者分为两组：一组为GC敏感组：GC(泼 尼松)足量治疗8周时和GC减量后，尿蛋白持续为阴性者，共25例：一组为GC抵抗组： 泼尼松足量治疗8．12周，尿蛋白仍维持在(++)以上，共26例患者。两组病例的发病年龄、 病程、GC用量、血尿素氮、肌酐和白蛋白水平差异无显著意义，标本收集均在清晨进行。 健康对照组：选择了23例健康献血员作为对照，年龄31±10．6岁(16．60岁)。在静脉采血 前1周内，未患感染性疾病，未曾服用过GC和免疫抑制剂。