人阴茎海绵体平滑肌细胞三维培养模型的建立.pdfVIP

12 ChineseJournalofAndrologyVo1．24No．22010 人阴茎海绵体平滑肌细胞三维培养模型的建立 陈瑞宝 刘继红 饶 可 胡 涛 王 涛 余 杨 王少刚 叶章群 华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科 (武汉 430030) 摘要 目的 观察人阴茎海绵体平滑肌细胞 (hCCMCs)在三维培养系统中的生物学特性。方法 体外 分离hCCMCS，并用差速贴壁法进行纯化 。免疫组化的方法检测a一平滑肌肌动蛋白 (a．SMA)的表达 ， 进行hCCMCs的鉴定。在单层贴壁培养的基础上，将hCCMCs在胶原凝胶中培养，形成三维培养系统，并对 hCCMCs的形态结构、增殖情况进行研究。结果 原代培养的hCCMCs细胞形态不均一，经过差速贴壁法纯 化后，细胞形态均一 ，免疫组化显示大多数细胞 a—SMA阳性表达。三维培养系统中，hCCMCs在不同层面 上呈三维生长。hCCMCs在三维培养系统中培养 10d后，细胞数量无明显增殖 (P0．05)，明显低于贴壁 培养条件下细胞增殖速率 (P0．01)。结论 hCCMCs三维培养系统可 以观察hCCMCs在三维条件下的生 长、增殖状况，研究hCCMCs与微环境的相互作用关系，有望为相关研究找到一种更为简单、可控性更强的 体 内实验替代方法 。 关键词 阴茎； 肌细胞，平滑肌； 细胞培养技术； 人 中图分类号 R394．26 Establishmentofthethree．dimensionalculturemodelofhUman corpuscavernosum smoothmusclecells ChenRuibao，LiuJihong ，RaoKe，HuTao，WangTao，YuYang，W angShaogang，YeZhangqun DepartmentofUrology，TongjiHospital，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology， Wuhan，Hube 430030，China Abstract 0bjective Toanalyzethebiologicalpropertiesofhumancorpuscavernosumsmoothmusclecells (hCCMCs)underthree—dimensionalculturesystem．Methods hCCMCswereisolatedinvitro，andpurifiedbygradient velocitysedimentation．hCCMCswereidentifiedbytheexpressionofQ—smoothmuscleactin(Q—SMA)．Onthebasis ofadherentmonolayerculture，hCCMCswereseededintocollagengelforthree—dimensionalcultureMorphologyand proliferationofhCCM Cswerestudiedunder3D state．Results ThemorphologyoftheprimaryhCCM Cswas heterogeneous．Aftergradientvelocitysedimentation，themorphologyofhCCMCsbecamehomogeneous．Positive expressionofQ．SM A wasdetectedinmostofhCCMCsbyimmunohistochemistry．hCCMCsgrew atdifferentlevels inthree．dimensionalculturesystem．NOsignificantproliferationwasfoundinhCCMCsafter10daysthree—dimensional culture(P0．05)．Proliferationrateofthem wassignificantlylowerthanthatofadhe