血清尿酸（UA）测定—磷钨酸还原法.docVIP

授课对象：06级检验1-5班 课 时：2学时 血清尿酸（UA）测定—磷钨酸还原法 目 标：1.掌握磷钨酸还原法测尿酸的原理及注意事项 2.规范地进行尿酸测定，正确地使用离心机 3.了解血清尿酸测定的临床意义 实验用品： 离心机、洗耳球、712型分光光度计、磷钨酸贮存液、磷钨酸应用液、钨酸试剂、10%碳酸钠溶液、尿酸标准贮存液、（6mmol/L）尿酸标准应用液（0.3mmol/L） 内 容： 一、原理： 二、操作步骤： 加入物（ml） R S B UA标 准 液 － 0.5 － 血 清 0.5 － － 蒸 馏 水 － 0.5 钨 酸 试 剂 4.5 4.5 4.5 充分混匀，静置数分钟。R离心，另取3支试管编号 R管上清液 2.5 － － S管上清液 － 2.5 － B管上清液 － － 2.5 10%碳酸钠 0.5 0.5 0.5 混匀，室温下放置20min,波长660nm比色 三、计算： 血清尿酸μmol/L=AR/AS×300 四、正常参考值： 男：149~416μmol/L 女：89~357μmol/L 五、临床意义： 1、高尿酸血症与痛风 ①尿酸排泄减少：见于原发性肾功能不全、药物引起的尿酸潴留（如各种利尿药、水杨酸及抗结核药能抑制肾小管分泌尿酸）、铅中毒、铍中毒、氯仿中毒以及甲状腺功能亢进（可引起肾小管功能受损）、酸中毒（与尿酸竞争肾小管上皮细胞主动分泌机制）。 ②嘌呤代谢亢进：见于多发性骨髓瘤、红细胞增多症、地中海贫血、传染性单核细胞增多症等，由于核蛋白转换率增快，使尿酸生成过多。 有的高尿酸血症既由于尿酸合成增多，又由于肾排出尿酸减少。如慢性酒精中毒、妊娠高血压综合征等。 2、低尿酸血症 ①尿酸生成过少：见于黄嘌呤尿症（由于先天性黄嘌呤氧化酶缺乏，使尿酸不能正常生成，故患者血与尿酸水平很低，而排出大量黄嘌呤和次黄嘌呤），服用别嘌呤醇类药物（使嘌呤氧化酶抑制或假性反馈抑制嘌呤生物合成，从而阻断尿酸生成，出现低尿酸血症，伴有尿中尿酸排出减少和黄嘌呤排出增多）。 ②肾排出尿酸过多：见于Fanconi征（先天性肾小管疾患，使肾小球滤液中尿酸不能被重吸收）、大剂量应用阿司匹林、可的松、和ACTH（可抑制肾小管对尿酸的重吸收和增加肾小管的分泌，使尿酸的清除增加）。 六、注意事项： 磷钨酸贮存液的配制可置于高压消毒器内（压力0.176MPa，即2kg/cm2），温度132℃，时间5分钟，取出冷却后加浓过氧化氢溶液2滴，然后用蒸馏水稀释至1L。其效果与2小时回流加热一致。 红细胞内含有较多的非特异性还原物质，因此，用血清或血浆测定比全血好。但不能用草酸钾作抗凝剂，因草酸钾与鳞钨酸会形成不溶性的磷钨酸钾而导致显色液混浊。 血清或尿液标本中的尿酸在温室下可稳定3天，尿液标本经冷藏后，可引起尿酸盐沉淀，此时可调节pH至7.5~8.0，并将标本加温至50℃，待沉淀溶解后再测定。 尿酸在水中溶解度极低，但易溶于碱性碳酸盐或磷酸盐溶液中，所以，配制标准液时加入碳酸锂并加热助溶。如无碳酸锂可用碳酸钠或碳酸钾代替。 用钨酸制备无蛋白血滤液时，滤液pH过低，可引起尿酸沉淀。如滤液pH小于3时，尿酸回收率将减低。用半量沉淀剂，滤液pH在3.0~4.3之间，回收率为93%~103%；用全量沉淀剂时，滤液pH在2.4~2.7之间，回收率为74%~97%。 严格掌握比色时间，在加入磷钨酸溶液放置20分钟后，应在30分钟内比色完毕。 课后小结：