冬虫夏草及其代用品中虫草素的LC／ESI—MS定量分析.pdfVIP

第 27卷 ，第 2期 光 谱 实 验 室 、o1．27 ，No．2 2010年 3月 ChineseJournalofSpectroscopyLaboratory March 。2 0 10 冬虫夏草及其代用品中虫草素的 LC／ESI—MS定量分析 贺云彪 黄兰芳 (湖南省常德市药品检验所 湖南省常德市 415000) “(衢州学院化学与制药工程系 浙江省衢州市九华北大道 78号 324000) 摘 要 提出了一个灵敏度高、选择性好的测定冬虫夏草及其代用品中主要活性成分虫草素含量的 LC／ESI—MS方法。用 甲醇为提取溶剂，采用选择性离子检测 (SIM)和电喷雾离子化 (ESI)；以ShimadzuVP— ODS为色谱柱；流动相为水一甲醇一甲酸 (87：12：1)，2-氯腺苷为 内标。虫草素回归方程为Y一0．1947+ 0．00161．r一0．9992，线性范围0．4— 120．Og ·mL_。；虫草素平均回收率为 98．2 。该方法 已成功用于不 同产地冬虫夏草及其代用品中虫草素含量的分析，可用于冬虫夏草及其代用品的质量控制。 关键词 液相色谱 ；电喷雾离子化；质谱；冬虫夏草 ；虫草素 中图分类号 ：0657．63 文献标识码 ：B 文章编号：1004—8138(2010)02—0561—04 1 引言 冬虫夏草 (C~rcdycepssinens~)是我国传统名贵中药材之一，系麦角菌科虫草属真菌寄生于翅 目 蝙蝠蛾科 (Hepialidae)昆虫幼虫上所形成的子座及幼虫尸体的复合体[1]，主要分布在我 国青海、西 藏、四川、云南等海拔 3oOO一5100m的高寒草甸区。由于自然条件的限制，来源紧缺、价格昂贵，人 们便利用从冬虫夏草中分离的不同菌种经深层发酵培养虫草人工菌丝体作为其替代物，以满足市 场需求 。研究表明冬虫夏草及其代用品含有虫草素、腺苷、腺嘌呤、虫草酸、虫草多糖等活性成分，尤 以虫草素等具有明显的药理作用，如可用于治疗高血糖症、肝脏疾病、肾功能紊乱和肾衰竭 ]，故 测定虫草素的含量有重要意义。测定冬虫夏草中虫草素等核苷类物质的含量 ，主要采用紫外分光光 度法[33、薄层色谱法 (TIc) 、高效液相色谱法 (HPLC)E 和毛细管 电泳法 ¨ 引，其 中以HPIC 法最适用 ，但该类方法存在灵敏度低 、选择性差且耗时过长等缺点。本文采用 LC／ESI—MS法测定 冬虫夏草及其代用品中虫草素，为冬虫夏草及其代用品的质量评价提供了一种快捷、有效的检测方 法。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 ShimadzuLCMS一2010液相色谱一质谱联用仪 (日本岛津公司，含 LC一10Advp高压泵，FCV一 10Alvp低压梯度装置 ，DGU一14A在线脱气机 ，CTO一10Avp柱温箱，SPD—M10Avp二极管阵列检测 器 ，四极杆质谱仪)。 ① 联系人 ，电话 ：86—570—8026668；E—mail：If18huang@yahoo．com．cn 作者简介：贺云彪 (1963一)。男。湖南省常德市人，高级工程师，主要从事药物分析研究工作。 黄兰芳 (1963一)，男，湖南省常德市人，教授，主要从事中药现代化研究工作。 收稿 日期：2009—08—05；接受 日期：2009—09—04 光谱实验室 第 27卷 虫草素和内标 2一氯腺苷购于美 国Sigma公司(St．Louis，MO)；甲酸为分析纯；色谱纯甲醇购于 江苏汉邦科学技术有限公司；青海、西藏产冬虫夏草及云南和辽宁产蛹虫草由常德市药品监督检验 所提供 。 2．2 色谱条件 色谱柱为 ShimadzuVP—ODS(2．0mm ×150ram，5~／m)；色谱柱 前用 WatersC18小柱保护 (Waters，Milford，MA，USA)；流动相为水一甲醇一甲酸 (87：12：1)，使用前超声脱气，流动相中的每 一 组分 均 用 0．22m 微 孔 滤膜过 滤，配制 流动 相用 Milli—Q