疏肝活血方合药血清对大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管新生相关基因表达的影响.pdfVIP

2010年3月 第 12卷 第3期 中国现代中药 ModemChineseMedicine Mar．2010 Vo1．12 No．3 翅黼 疏肝活血方含药血清对大鼠骨髓源性 内皮 祖细胞血管新生相关基因表达的影响△ 李大勇 ，陈文娜 ，谷峰 ，马贤德 ，王柏庆 ，袁明殿 (1．辽宁中医药大学附属医院血管外科，辽宁 沈阳 l10032； 2．辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110032) [摘要] 目的：观察疏肝活血方含药血清对大鼠骨髓来源的内皮祖细胞 (EPCs)血管新生相关基因VEGF、 HGF和HIF一1仪表达的影响。方法：从大鼠骨髓中获取单个核细胞，体外培养 1周后，采用免疫荧光细胞化学和激 光共聚焦显微镜鉴定，于培养体系中加入疏肝活血方及其拆方的含药血清，培养24h，Real—TimePCR方法检测 EPCs中VEGF、HGF和HIF-1 的mRNA表达。结果：贴壁细胞培养诱导后具有内皮细胞的形态学和免疫学特征， Real—TimePCR检测结果发现，疏肝活血方含药血清能明显提高 EPCs中VEGF、HGF、HIF—loL的mRNA表达量，与 对照相比差异具有显著意义(P0．01)。结论 ：疏肝活血方能促进EPCs中血管新生相关基因VEGF、HGF和HIF．1仅 的表达，是该方促血管新生的机制之一。 [关键词] 内皮祖细胞；疏肝活血方；血清药理学 治疗性血管新生 (therapeuticangiogenesis)在缺 号 ：SYXKDK) (辽)2003-0019。 血性疾病的治疗中具有美好的前景，是使缺血部位 1．2药物 的侧支血流增加、微循环得以改善的主要机制。人 疏肝活血方(柴胡20g、香附20g、当归 15g、赤 体循环血液中存在内皮祖细胞 (EPCs)，在缺血的刺 芍 15g)，疏肝方 (柴胡20g、香附20g)，活血方(当 激下，EPCs能够被动员、迁移、黏附和分化成 内皮 归15g、赤芍 15g)，分别按体表面积比率折算出大 细胞，新生血管中25％的内皮细胞 由EPCs分化而 鼠的等效用药剂量，计算出水煎剂的终浓度，中药 来_1]，EPCs对于血管新生和维持内皮功能完整具有 饮片 柴 胡 (RadixBupleuri，批 号 090308)、香 附 重要作用 。 (Rhizoma CypeH，批 号 090310)、 当 归 (Radix 临床实践发现，对于肢体缺血性疾病，疏肝法 Angelica，批号090411)、赤芍(RadixPaeoniaeRubra， 与活血法配伍应用，可使气机调畅，血脉通利，患 批号090312)均购 自辽宁中医药大学附属医院，并 者肢体的温度、颜色、间歇性跛行以及破溃的创面 经该院中药教研室王淑清教授鉴定。 均有一定程度的改善 J，实验研究证实疏肝活血方 1．3试剂 能有效促进血管新生及 EPCs数量的增加、功能的改 胎牛血清 (美 国Hyclong公司)，血管 内皮生长 善，减少 EPCs的凋亡 4J。本研究拟进一步通过 因子 (vascularendothelialgrowthfactor，VEGF) (美国 EPCs培养体系观察在疏肝活血含药血清刺激下， Biosource公司)，碱性成纤维细胞生长因子 (美 国 EPCs中血管新生相关基因 VEGF、HGF和 HIF一1仪 RD公司)，纤维连接蛋 白(新西兰 CalBiochem公 表达的变化。 司)，M199培养基(美国Gibco公司)，Dil标记的乙 1 材料 酰化低密度