白质组学研究的相关技术进展.pdfVIP

· d· 生物学教学2010年(第35卷)第3期 蛋 白质组学研究的相关技术进展 冯 雪 王 彬 (河北省廊坊师范学院生命科学学院o65o00) 黄 占景 沈银柱 (河北师范大学生命科学学院石家庄 o50o~6) 摘 要 蛋白质组学的特点是采用高分辨率的蛋白质分离手段，结合高效率的蛋白质鉴定技术，全景式地研究在各种特定情况下 的蛋白质谱。本文就蛋白质组学研究中的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、质谱技术和蛋白质芯片技术的研究进展进行了综述。 关键词 蛋白质组学 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 质谱技术 基因组中的大多数基因最终都是通过蛋白质的表 的技术分析和图像分析软件及网络技术的支持。 达、修饰和相互作用来实现其功能的。因此对蛋 白质 1．1 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 双向凝胶电泳是基 的分析已经成为生命科学研究的重要内容之一，这对 于第一向蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二 解析生命现象的分子机制至关重要。随着多种生物基 向则按分子量的不同用SDS—PAGE分离 ，把复杂蛋白 因组计划的实施和完成、蛋 白质研究技术的发展和突 质混合物中的蛋 白质在二维平面上分开。近年来，经 破以及生物信息学的发展 ，人们开展 了大规模的蛋白 过多方面改进双向凝胶电泳已成为研究蛋 白质组的核 质分析，蛋白质组学随之产生。 心方法 4j。利用双向点脉技术来分离某一蛋白质组 1 蛋 白质组学的相关技术 所有蛋白的两个关键参数是其分辨率和可重复性。在 1994年，澳大利亚 Macquarie大学 的Wilkins和 目前情况下，双 向凝胶 电泳 的一块凝胶板 (16em Williams首先提出了蛋白质组 (proteome)的概念，它源 x20cm)可分离出3000~4000个，甚至上万个可检测的 于蛋白质(protein)基因组 (genome)两个词的结合 ，意 蛋白斑点，这与l0万个基因可表达的蛋白数 目相比还 为在一种细胞内存在的全部蛋白质。尽管蛋白质组概 是太少了。20世纪80年代开始采用固定化pH梯度 念提出至今只不过十多年时间，但它的研究可以追溯 胶，克服了载体两性电解质阴极漂移等许多缺点而得 到二十多年前0’Fanel和Klose各 自创建的蛋白质高 以建立非常稳定且可随意精确设定的pH梯度。据此 分辨双向凝胶 电泳 (two—dimensionalgeleleetrophore— 可建立很窄pH范围的凝胶电泳，对特别感兴趣的蛋 sis，2一DE)。O’Farrel将大肠杆菌细胞抽提物进行双 白斑点做第二轮分析，从而大大提高了分辨率，这是双 向电泳后，分离到 1100个蛋白质组分，从此拉开了蛋 向凝胶电泳技术上的一个非常重要的突破。 白质组研究的序幕LlJ。蛋 白质组研究 中主要应用 的 目前双向凝胶电泳技术仍面临着挑战，如低拷贝 技术包括 ：双向电泳 (2一DE)、新型质谱 (MS)技术、数 蛋白的鉴定、极酸或极碱蛋 白质 的分离、极大 ( 据库设置与检索系统等。为了保证分析过程的精确性 200kD)或极小(10kD)蛋白的分离和难溶蛋白的检 和重复性，大规模的样品处理机器人也被应用。整个 测，这类蛋白涉及一些重要的膜蛋白。基于此，国际上 研究过程包括：样 品处理、蛋白质分离、蛋白质丰度分 也重视以色谱／电泳一质谱为主的技术。 析、蛋白质鉴定等步骤。当前 ，蛋白质组分析虽然以双 1．2 质谱技术 质谱 (massspect