神经节苷脂对脑梗死大鼠的神经保护作用及对脑组织Fas蛋白表达的影响.pdfVIP

山东医药 2010年第 50卷第 9期 神经节苷脂对脑梗死大 鼠的神经保护作用 及对脑组织 Fas蛋 白表达的影响 王 诺 。马风杰 ，张 磊，李东红 (潍坊医学院神经病学教研室，山东潍坊 261042) 摘要：目的 研究神经节苷脂对脑梗死大鼠的神经保护作用以及对脑组织Fas蛋白表达的影响。方法 线栓 法制作大鼠脑梗死模型，将其分为两组 ，治疗组术后每 日腹腔注射神经节苷脂 10me,／kg、1次／d，对照组给予等量生 理盐水。比较两组术后不同时间点神经功能缺损评分 (NSS)、病灶大小、脑组织形态学变化和Fas蛋白表达水平。 结果 治疗组术后 3、5d时的NSS明显高于对照组；梗死体积明显小于对照组；术后 5d时的神经细胞损伤明显轻 于对照组；术后 l、5d时的Fas蛋白表达水平明显低于对照组。结论 神经节苷脂对脑梗死大鼠具有神经保护作 用，可以降低 Fas蛋白的表达水平。 关键词：神经节苷脂 ；脑缺血；Fas蛋 白 中图分类号：R743．3 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2010)09-0032-02 脑梗死后神经元的坏死与凋亡是脑损伤的重要 ③Fas蛋 白表达检测：取脑组织，从额极开始切成2 病理生理过程 ，细胞凋亡是多基因多因素共同作用 mm厚冠状面切片，经固定、脱水、石蜡包埋后每隔 的结果，其中Fas基因是促进细胞凋亡的重要基因， 100 m连续切片，取缺血中心部位的切片行 HE染 其表达产物Fas蛋 白与Fas配体结合后激活天门冬 色和免疫组化染色。免疫组化按试剂盒说明书操 氨酸蛋 白酶(caspase)，导致靶细胞凋亡。神经节苷 作，染色后经梯度乙醇脱水干燥，二甲苯透明，中性 脂是位于细胞膜表面的一种含唾液酸的糖鞘脂，其 树脂封固，显微镜下观察。阴性对照：以PBS缓冲 对神经元的分化、生长、轴浆运输及再生有重要意 液代替 Fas蛋 白抗体。Fas蛋 白阳性表达的细胞胞 义。2009年 3—7月，我们观察了神经节苷脂对大 质呈棕黄色或褐色。在400倍光镜下，每张切片随 鼠脑梗死的神经保护作用及对脑组织 Fas蛋白表达 机取缺血侧额顶叶及纹状体区不重叠的3个视野进 的影响，并探讨其作用机制。 行照相，用 ChemImage5500V2．03图像分析系统测 1 材料与方法 定免疫表达阳性反应产物的光密度 OD值。每只大 1．1 动物与试剂 Wistar大鼠36只，雌雄各半，体 鼠取3张相 同部位的切片检钡0，求平均值。 质量 250—300g，购 自潍坊医学院动物房。随机分 1．3 统计学方法 采用 SPSS13．0软件进行数据处 成治疗组和对照组各 18只，每组又分成 3个亚组各 理，以x±s表示，两样本均数 比较用 t检验。P≤ 6只，分别为缺血后 1、3、5d组。主要试剂：神经节 0．05为有统计学意义。 苷脂 (齐鲁制药有限公司)；一抗为鼠抗人Fas单克 2 结果 隆抗体 (北京博奥森生物工程有限公司)；SABC免 2．1 两组术后不同时间NSS评分比较 见表 1。 疫组化试剂盒(北京中杉金桥生物工程有限公司)。 表 1 两组术后不 同时间NSS评分比较 (分，x-4-$) 1．2 方法 1．2．1 模型制作及处理 参考文献 方法制作脑 梗死大鼠模型。治疗组术后每 日腹腔注射神经节苷 注 ：与对照组比较 ，P‘0．叭 脂 10mg／kg，1次／d，对照组予以等量生理盐水。 2．2 两组术后不同时间梗死体积比较 见表 2。 1．2．2 检i贝0方法 ①神经功能缺损 (NSS)评分：各