ABCE1基因siRNA表达质粒的构建及鉴定.pdfVIP

维普资讯 中国医科大学学报 第36卷 第 6期 2OO7年 l2月 J(】URNALOFCHINAMEI)lCALI RsrrY Ⅷ ．36 No．6 Dec．2007 ABCE1基因siRNA表达质粒的构建及鉴定 郑毛根 ，田大力 ，黄波 (中国医科大学附属第 四医院胸外科，辽宁 沈阳 1lOO32) [摘要]目的：构建针对人ABCE1基因siRNA表达质粒，为进一步研究该基因功能奠定基础。方法：合成含靶向ABCE1基因 siRNA转录模板的茎环结构 ，与两端分别有 BanlHI、Hindm酶切位点的RNAi—ReadypSIREN—DNR—DsRed—Express质粒连 接，大肠杆菌中扩增，测序鉴定。结果 ：转化大肠杆菌涂布平板长出阳性菌落，重组质粒电泳初步说明质粒构建成功，测序结 果表明RNAi—ReadvpSIREN—DNR—DsRed—Express的酶切位点BamHI、Hindm之间有71bp的插入片段 ，其序列与所设计、合 成的ABCE1的siRNA转录模板序列一致。结论：siRNA转录模板完整正确地插入 RNAi—ReadypSIREN—DNR—DsRed—Express质 粒中。 [关键词]siRNA；质粒；ABCE1基因；构建 [中图分类号]Q784 [文献标识码]A [文章编号]0258—4646(2007)06—0697—03 ConstructionandidentificationofaplasmidexpressingsiRNAsinmanunalina celisaimedatABCE1gene ZHENG Mao—gen，TIAN Da—li ，HUANG Bo (DepartmentofThoracicSurgery，TheFourthMtiliated Hospital，ChinaMedicalUniveL,sity，Shenyang110032，China) [Abstract]Objective：ToconstructsiRNAsexpressingplasmidaimedatABCElgeneandstudythefunctionofABCElwihtRNAinterfer- encetechnology．Methods：First，atargetsequenceinhtemiddleofABCE lgenewasselected，andhtenaccordingtohteesquence，two complementary71metoligonueleotidesweresynhtesizedwiht 5single—strandedover—hangsaccordingtohtekitinalqua]，whichwere ligated wiht htehnearized RNAi—ReadypSIREN—DNR—DsRed—Express．Theplasnfidwas transformedinto DH5otbacteriatobeamplifiedandhten purified．Thepurifiedplasnfidwasidentifiedbygeleleetmphomsisandsequencing．Results：Th egelelectrophoresisnadsequencingshowed htathteplasmidwas identicalwiht htepositivecontrol，nadtheesuqencewasidentica]wiht whatwehaveinesrtde in，nadhterewasnoabet- rationssuchasnmtation，deletion，orinesrtion．Conclusion：Th eplasnfidwhichcanexpresssiRNAsaimedatABCE lgenehas beencon- struetedsuccessfully． 1Keywords]siRNA；plasmid；ABCE1gene；construction RNAi(RNAinterference)是指 由双链 RNA分子 DsRed—Express)购 自Ambion公司，全长 4552bp， (double—strandedRNAs，dsRNAs)介导的特异性基因 两