高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中硝基呋喃代谢物的研究.pdfVIP

澎江廖J-：矸学 2010年第3期 圃 高效液相色谱一串联质谱法测定蜂蜜中 硝基呋喃代谢物的研究 张平安，张建威，乔明武，唐责芳 (河南农业大学 食品科学技术学 院，河南 郑州 450002) 摘 要 ：探讨采用高效液相色谱一串联质谱 (LC—MS—MS)同时测定蜂蜜 中呋喃唑酮 、呋喃它酮 、呋喃西林 和呋喃妥因等代谢物的方法 ，采用电喷雾电离正离子 (ESI)、多反应监测 (RMR)模式检测 ，外标法定量 。4 种硝基 呋喃类药物在蜂蜜样品中3种不同水平的添加回收率为83．5％ ～96．1％ (r,／：6)，相对标准偏差为2．3％ ～ 8．6％；工作 曲线 的线性范 围为 1～10 g·kg～，呋喃它酮 、呋喃西林 、呋喃妥 因、呋喃唑酮 的检 出限为 0．5 Ixg ·kg～ 。 关键词 ：高效液相色谱一串联质谱 ；硝基呋喃代谢物 ；多反应监测 ；蜂蜜 中图分类号 ：TP391．76 文献标志码 ：A 文章编号 ：0528—90l7(20l0)03—0611-03 硝基 呋喃类药物 主要包 括呋喃唑酮 (AOZ)、 1 材料与方法 呋喃它酮 (AMOZ)、呋喃西林 (AHD)和呋喃妥 因，是合成广谱抗生素 ，发现于 1944年 ，曾作为 1．1 试剂材料 治疗药物和饲料添加剂 ，用于治疗和预防埃希氏菌 乙腈 (色谱纯)；甲醇 (色谱纯)；甲酸 (色 和沙门氏菌引起的哺乳动物消化道疾病 。由于硝基 谱纯 )；乙酸乙酯 (色谱纯 )；二 甲亚砜 ；衍生剂 呋喃类药物对人类健康具有潜在危害 ，欧盟将其列 (邻硝基苯 甲醛 2-NBA)；氢氧化钠 (优级纯)；盐 为 A类禁用药物 ，并于 1995年禁止在食用动物中 酸 (优级纯)硝基呋喃代谢物标准品：AOZ、SEM 使用。我国也于 2002年颁布 了禁止使用硝基呋喃 · HC1、AMOZ、AHD ·HC1 (Sigma公 司，纯度 类抗生素的禁令 。目前 ，硝基呋喃类药物是国 99．99％)。 际动物源性食品贸易的必检项 目，成为发达 国家限 1．2 仪器设备 制第三国出口的贸易壁垒 。 API4000液相色谱质谱联用仪 ：安捷伦 1100 硝基呋喃代谢产物可在酸性条件下水解 ，同时 液相色谱系统 ，三重 四极杆质谱仪 ，配有电喷雾离 可用邻硝基苯甲醛 (2-NBA)衍生化 ，经提取和净 子源 ；涡旋混合器 ；电子天平 ；恒温箱；pH计 ； 化后 ，用液相色谱 (HPLC—uV) 、液相色谱质谱 离心机 ；旋转蒸发仪 ；氮气吹干仪 ；5mI移液枪 ； 法 、液相色谱 串联 质谱法测定 。通常 Lc—uV 5mL注射器 ；0．45 m虑膜 。 法只能检测 AOZ和 AMOZ，且检 出限达不 到欧盟 1．3 样 品处理 规定的要求 。而对于 HPLC—MS欧盟认为只能用于 1．3．1 水解及衍 生 硝基呋喃代谢产物的筛选实验 ，对检出的阳性结果 称取 1．O0g蜂蜜样 品于 50mL聚四氟乙烯 离 必须再用 HPLC-MS—MS进行验证 。 心管 中，振荡 15rain。4000r·min 离心 3rain， 我们采用代谢物水解与衍生化同步进行 ，液液 弃去上清液 ，加 30mL浓度为 0．125mol·L 盐酸 萃取净化 ，液相色谱串联质谱检测，电喷雾 电离正 溶液，振荡5min，加 1．0mL衍生剂快速混合振荡 离子 (ESI)，多反应监测 (RMR)模 式检测 ，