2检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质.docVIP

?检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 一．实验目的：??尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，阐明实验原理—颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。 1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如： 葡萄糖 + Cu2+ + 4OH— ? 加热 ? 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（砖红色）+ H 2O 即Cu 2被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。淀粉遇碘变蓝色。 2．脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。 在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹，苏丹，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。 脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色橙红色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。 苏丹染色液染色：脂肪呈橙红，胞核呈兰色 3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。）三．实验材料 1．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）2．做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。 3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。四、实验试剂 斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）体积分数为50%的酒精溶碘液蒸馏水。 五、方法步骤： （一）可溶性糖的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1. 制备组织样液。 （去皮、切块、研磨、过滤） 苹果或梨组织液必须临时制备。 因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。 2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。 ? ? 3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。 应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂； ? 切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。 斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu ( OH ) 2在70~ 900C下分解成黑色CuO和水； 甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu OH生成。 4. 试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色（沉淀） 最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。 也可用酒精灯对试管直接加热。 防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤； ? 缩短实验时间。 （二）脂肪的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。 干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。 因为浸泡时间短，不易切片浸泡时间过长，组织较软，切片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。 染色时间不宜过长。 ? 用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。 ? 酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。 用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。 ? 滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。 低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。 装片不宜久放。 时间一长，油滴会溶解在乙醇中。 ?三、蛋白质的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 制备组