β连环素在非小细胞肺癌中的表达及临床意义.docVIP

摘要】 目的 研究β连环素在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床生物学意义。方法 采用免疫组化SP法分别检测60例肺癌组织及20例正常肺组织中β连环素的表达。结果 60例NSCLC组织中β连环素表达的阳性率为30.0% ，20例正常肺组织中β连环素表达的阳性率为100.0%，差异具有统计学意义(P＜0.01)。有淋巴结转移的NSCLC中β连环素的阳性表达率为13.51% ，无淋巴结转移者为56.52%，差异有统计学意义(P＜0.01)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期β连环素的阳性表达率为45.83%，Ⅲ、Ⅳ期19.44%，差异有统计学意义(P＜0.05)。β连环素在NSCLC组织中的表达与年龄、性别、病理类型、临床分型及分化程度无关(均P＞0.05)。结论 β连环素可能与NSCLC的发生、TNM分期及淋巴结转移有关。 【关键词】 β连环素 肺肿瘤 免疫组织化学 肺癌在初次诊断时往往已发生了浸润和转移，细胞之间黏附作用的改变被认为在其间发挥重要作用〔1〕。β连环素是细胞内重要的蛋白质分子，不仅与钙黏附蛋白相互作用介导细胞黏附，也是Wnt信号传导通路中的关键调节因子。有关文献对β连环素在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及其临床价值尚存在争议〔2，3〕。本研究采用免疫组化的方法研究β连环素在NSCLC组织中的表达及与临床病理学之间的关系,为揭示NSCLC的转移机制及治疗提供依据。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　标本取自2002年9月至2006年11月在我院住院手术切除的60例肺癌患者，男45例，女15例；年龄36～81岁，平均58.93岁。所有患者术前均未行放疗和化疗。标本均经病理证实(鳞癌36例，腺癌24例)。根据1997年国际抗癌协会提出的TNM分期标准进行分期，其中I A期3例，I B期12例，ⅡA期0例，ⅡB期9例，ⅢA期12例，ⅢB期17例，Ⅳ期7例。对照组选择20例癌旁正常肺组织(距癌组织3 cm以上)。 所有标本均为福尔马林固定、石蜡包埋组织。连续4 μm厚切片。 　　1.2 方法 　　1.2.1 主要试剂 　　鼠抗人β连环素单克隆抗体（即用型）、SP通用试剂盒及DAB显色剂均购自北京中杉生物技术有限公司。 　　1.2.2 免疫组化染色 　　采用SP免疫组化法，严格按照SP试剂盒说明进行，以PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照为正常支气管黏膜上皮。主要步骤如下:石蜡切片脱蜡水化，于枸橼酸盐缓冲液(pH 6.1)中行微波抗原修复，过氧化物酶阻断剂阻断内源性过氧化物酶活性，非免疫性动物血清阻断非特异性反应，滴加鼠抗人β连环素单抗，4℃过夜。加生物素标记的第二抗体，加链霉抗生物素过氧化物酶溶液，DAB显色后自来水充分冲洗，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。 　　1.2.3 结果判定 　　β连环素阳性产物分布于细胞膜上，为粗细一致的棕黄色颗粒。标准参照Nakanishi等〔4〕的方法进行：高倍镜(400倍)下每个视野计数100个细胞，每张切片数5个视野，染色结果分为：(1)正常表达：肿瘤组织染色方式及强度与正常支气管上皮黏膜染色相同，切片内阳性细胞数≥90％；(2)异常表达：包括异质性表达(细胞膜染色强弱不等，染色阴阳性细胞混杂，切片阳性细胞数＜90％)、阴性表达(细胞膜染色缺失)及胞浆胞核染色。 　　1.3 统计学处理 　　所有资料均经χ2检验进行分析。 　　2 结 果 　　2.1 β连环素在正常肺组织及肺癌原发灶中的表达 　　20例正常肺组织中阳性表达率为100.00%（20/20），60例肺癌组织中的阳性表达率为30.00%(18/60),二者比较，差异有统计学意义（χ2=29.474，P＜0.01）。在异常表达的肺癌组织中11例出现了单独胞质表达,6例出现了缺失表达。 　　2.2 β连环素表达与临床病理特征的关系 　　NSCLC中淋巴结转移组β连环素阳性表达率为13.51%，无淋巴结转移组为56.52%，差异具有统计学意义（P＜0.01）。β连环素表达还与肿瘤TNM分期有关（P＜0.05）。β连环素的表达与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤的病理类型、分化程度及临床分型均无关(均P＞0.05)。见表1。表1 NSCLC组织中β连环素的表达与临床病理特征的关系（略） 　　3 讨 论 β连环素是胞质内糖蛋白，基因定位于人染色体3p21，分子量为92 kD。与γ连环素以互斥方式同E钙黏附素胞质尾部的连接素结合域结合并通过α连环素与肌动蛋白及细胞骨架结合，调节E钙黏附素的黏附作用；同时β连环蛋白参与Wnt信号通路，介导APC／β连环素／Tcf/lef1构成的wg／wn