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卷 期 生 物 工 程 学 报
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年 月
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加载!#$ 抗原肽的!%’ ()(* 单体及其四聚体制备和鉴定
， ，
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何贤辉 徐丽慧 刘 毅 蔡小嫦 曾耀英
/ （组织移植与免疫教育部重点实验室，暨南大学，广州%/0#! ）
! （暨南大学生物工程研究所，广州%/0#! ）
# （暨南大学第一附属医院皮肤科，广州%/0#! ）
$ （郑州大学第一附属医院皮肤科，郑州$%%! ）
摘 要 细胞毒 淋巴细胞（ ）在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用，因而特异性 的检测相
5 E5F E5F
当重要；而过去检测E5F 的方法都是间接的，最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性E5F 的有效而
特异的方法，成为目前研究5 细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序，利用该程序成功制备
加载人巨细胞病毒（ ）抗原肽的 四聚体，具有特异性结合 活性。 重链基因是通过
GE+ GF4.4! E5F GF4.4 !/
方法从 J 供者白细胞中克隆，进而以 方法构建在羧基端融合生物素化酶 底物肽（ ）的
H5.IEH GF4.4! IEH KL4 KMI
（ ）重链胞外区原核表达载体， 重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达，主要以包涵体形式存在。加
GF4.4 !/ 4! 4!
载抗原肽的可溶性 单体是 胞外区在轻链 微球蛋白和 限制性 抗原肽（ ，
4! 4! ! GF4.4! GE+ NN0%$1%.%# *FI+45
!
*F）存在时通过稀释法复性获得，以KL4 对其进行生物素化，然后以阴离子交换树脂纯化，得到的纯化4!.*F 单
体与 按 ： 比例混合形成四聚体，结合程度在 以上，流式细胞仪分析显示该四聚体具有与
MOL6NO,PCA.I: $ Q7
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