厚壳贻贝lysin基因的克隆【毕业论文】.docVIP

本科毕业论文 （20 届） 厚壳贻贝lysin基因的克隆 专业：生物科学 目录 摘要 I Abstract II 引言 1 1 材料与方法 2 1.1 实验材料 2 1.2 实验仪器和设备 2 1.3 实验药品和试剂 2 1.4 实验方法 2 1.4.1 总RNA的抽提 2 1.4.2 cDNA的合成 3 1.4.3 模板的有效性检测 3 1.4.4 厚壳贻贝M7 lysin基因的克隆 4 2 结果 5 2.1 总RNA纯度和完整性情况 5 2.2 β-actin扩增结果 5 2.3 厚壳贻贝M7 lysin基因的克隆 6 3 讨论与总结 7 3.1 总RNA的提取 7 3.2 厚壳贻贝M7 lysin 7 小结 9 参考文献 10 致谢 11 [摘要] M7 lysin位于贻贝精子顶体中，是溶解卵黄膜、促进受精作用的重要蛋白质，决定了贻贝种间精卵识别的特异性。本实验采用Trizol法提取琼脂糖凝胶电泳检测得到28S、18S、5S三条清晰亮带，证实了所提取到的总RNA是完整的，可用于进一步实验研究；总RNA样品经过反转录得到cDNA作为模板，经PCR扩增得到约270bp管家基因β-actin扩增图谱，证明模板可用；根据已发表的贻贝M7lysin基因序列设计兼并性引物，经PCR扩增得到540bp的目的条带，与预期大小一致，推断为厚壳贻贝M7lysin分子。 [关键词] 厚壳贻贝；M7 lysin；克隆； RNA；提取；检测 Abstract [Abstract] M7 lysin in mussels in the sperm acrosome is dissolved yolk membrane, and promote the importance of fertilization proteins, determines the mussel species specificity of sperm-egg recognition. In this study, thick shell was extracted by Trizol Yi Beixiong Organization of gonadal RNA, reverse transcription to cDNA as a template, cloned M7lysin genes. The results showed that the extracted total RNA by agarose gel electrophoresis detected by 28S, 18S, 5S three clear bright band, confirming the total RNA is extracted to complete, can be used for further experimental studies; total RNA samples After reverse transcription cDNA as a template, the PCR amplified by about 270bp was amplified housekeeping gene β-actin patterns show that the template can be used; mussels M7lysin based on the published gene sequence of degenerate primers, PCR amplified 540bp purpose bands, consistent with the expected size deduced for the thick shell mussel M7lysin molecules. [Key words] Thick shell mussel; M7 lysin; clone; RNA; extraction; detection 引言 厚壳贻贝（Mytilus coruscus Gould）隶属于软体动物门、双壳纲、异柱目、贻贝科。贻贝肉制品称“淡菜”，营养丰富，含蛋白质53.5%，脂肪6.9%，糖17.6%,无机盐8.6%，以及各种维生素和碘、铁、钙等物质，且肉质鲜美，又具有极大的药用价值。《本草纲目》载述贻贝可治疗虚痨伤惫，经血减少，吐血久痢等。现代药理学结果也表明，贻贝可治疗口角炎，舌炎，眼疾和贫血等。另外，贻贝的壳是贝雕工艺的原料，又可加工为贝壳饲料。由此可见，贻贝浑身是宝，其经济价值不容忽视。 海洋无脊椎动物在受精过程中将精子及卵细胞广播于水中，二者通过化学吸引力结合到一起，精子顶体泡打开，内容物质释放并溶解卵黄膜，精子从打开的卵黄膜孔道进入，