新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF162蛋白的表达、纯化及抗体制备.pdfVIP

第 30 卷 第 1 期 广东海洋大学学报 Vol.30 No.1 2010 年 2 月 Journal of Guangdong Ocean University Feb. 2010 新加坡石斑鱼虹彩病毒 ORF162 蛋白的 表达、纯化及抗体制备 1,2 1,3 1 1 夏立群 ，梁海鹰 ，江韶英 ，张尧清 （1. 广东海洋大学水产学院，广东 湛江 524025 ； 2. 中山大学生命科学学院，广东 广州 510275 ； 3. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东 湛江 524088 ） 摘 要：将新加坡石斑鱼虹彩病毒（Singapore grouper iridovirus ，SGIV ）的ORF162 的开放式阅读框插入 pET-32a 表达载体 T7 启动子控制下的 6-His·Tag 编码基因上游，构建 SGIV ORF162 原核表达质粒 pET-ORF162 。表达质粒 转化入大肠杆菌 BL21 (DE3)菌株，经 IPTG 诱导，成功表达 SGIV ORF162 融合蛋白。对 IPTG 浓度、诱导温度、 诱导时间等诱导表达条件进行优化后，确定在 0.7 mmol/L IPTG、16 ℃条件下诱导 14 h 时可溶性 SGIV ORF162 重 组蛋白占重组蛋白总量的 95%。经镍琼脂糖凝胶纯化，获得纯度为 90%以上的 SGIV ORF162 蛋白。用纯化的 SGIV ORF162 蛋白免疫小鼠，获得高效特异的 SGIV ORF162 多克隆抗体。 关键词：新加坡石斑鱼虹彩病毒；原核表达；多克隆抗体 中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：1673-9159 （2010 ）01-0059-06 Expression, Purification and Antibody Preparation of Singapore Grouper Iridovirus ORF162 XIA Li-qun 1, 2, LIANG Hai-ying 1, 3, JIANG Shao-ying 1, ZHANG Rao-qing 1 (1. College of Fishery, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524025, China; 2. School of Life Science, Sun Yat-sen University, China; 3. Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals, Zhanjiang 524025, China) Abstract: Full length of SGIV ORF162 was inserted into the prokaryotic vector pET-32a fused with the down stream 6-His⋅Tag. The expression vector was