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鱼用DNA疫苗的研究现状 许秀芹 (上海水产大学生命学院，上海，200090) 【摘要]DNA疫苗是一种新型疫苗。文章简要介绍了DNA疫苗的构建、作用机理、接种方法，并对DNA疫苗在水产上的应 用做 了展望。 关【键词】鱼类 DNA疫苗 现状 RECENTSITUATIoN oFSTUDY oN DNA VACCINE XU Xiu——qin (CollegeofLifeScience-Technology，ShanghaiFisheriesUniversity，Shanghai2ooo9o) Abstract：DNAvaccineisanew-typevaccine．ThispaperreviewstheconstructionoftheDNAvaccine,itsmechanism andhte wayofinoculationbriefly．TheapplicationoftheDNAvaccineinaquicuhureisprospectedtoo． Keywords：fish；DNA vaccine；recentsituation DNA疫苗又称核酸疫苗和基 因疫苗 ，它是通过把编码病原体 的保护性抗原蛋 白的基 因注射给宿主细 胞表达抗原蛋 白，达到免疫 的效果 。 1990年美 国威斯康 星大学 W0lf等人 1_发现将质粒 DNA(裸露 的 DNA)注 射给小 鼠能引起外源基 因的 长期表达 。三年后 ，Ulurer等人l2l进一步证 实将病毒 蛋 白基 因注射给动物能引起免疫反应 ，从此诞 生了 DNA 免疫技术 。此后大量的研究证 明 ，编码病毒 、细菌和寄生虫不同种 类抗原基因的质粒 DNA能引起鸡 、鼠、牲 畜 、灵长类和鱼等物种 强烈而持久的免疫反应 ，使 之成为继减毒 疫苗 、灭活疫苗、亚单位疫苗和 重组多肽疫 苗之后又一新型疫苗 。 早期有关DNA疫苗 的研究主要集 中在哺乳动物 ，现在发现鱼类的细胞 同样能够有效地表达 由真核 表 达载si携带的外源蛋 白基因 ，因此越来越 多学者开始将 DNA疫苗应用于鱼类 。 1 DNA疫苗的构 建 1．1 抗原基 因的制备 DNA疫苗是通过原位表达具 有天然 活性外 源基 因产 物来诱 导宿 主产 生保护性免疫应答 ，因此筛选 保护性抗 原基 因是构 建DNA疫苗 的前提 。 目前 在鱼类病毒 DNA疫苗研 究中一般选 择编码病毒 表面糖 蛋 白(Glycoprotein)基 因作为抗原基 因构建 DNA疫苗 。Noonan等_3_首先报道 了某些病毒 的糖蛋 白基 因能 够在载体 中表达 ，他们把编码病毒性出血败血症病毒 (VHSV)和传 染性造血组织坏死病毒 (IHNV)的糖 蛋 白基 因克隆到杀鲑气单胞菌 (Aeromanassalmonicida)表达 载体 中 ，用糖蛋 白特异性 的单克 隆抗 体通过 免 疫 印迹 试验 ，发现糖 蛋 白基 因能够 以融合蛋 白的形式获 得表达 ，攻毒试验 表 明 ，受免虹鳟 能产 生针对病 毒 的保护性免疫。随后 Lorenzen等_4_和 Anderson等_5_的研 究也得 出了相似结果 。分别把 VHSV和 IHNV 糖 蛋 白基 因的质粒注 射到虹鳟体 内，攻毒 试验表 明 ，病毒糖 蛋 白基 因能够 分别诱导鱼体 产生针 对 VHSV 和 IHNV的保护性免疫 ，而用核衣 壳蛋 白基因构建 的质粒 pCMV4一N免疫虹鳟 并不产生抗 IHNV的中和 抗体 E5]。因此 以病毒表面糖蛋 白基 因作 为抗原基 因构建病毒 DNA疫苗 的方法是可行 的。而鱼类寄生虫疫 苗的研究则以多子小瓜虫 (1chthyophthiriusmultifiliis)的研 究较为系统 、深入 ，目前 已经完成对小瓜虫 的 保护性抗原 基 因的定位和序列 分析 6_，用小瓜 虫 的抑 动抗原 (immobilizationantigen，i-Ag)作 为抗原 基 因 构建的 DNA疫苗可 以有效激发斑 点叉尾鲴 (，ctalurusunctatus)的体液 免疫应答 ，产生 高水平 的血清抗 小 2 瓜虫 的抑动抗 体 。 对于 变异频繁 的病原体 ，则可 以选择各亚