川芎嗪对人肾小管上皮细胞SnoN蛋白表达的影响-.pdfVIP

V01．18No．5 ·411· 中国中医药科技2011年9月第18卷第5期sep．20ll 川芎嗪对人肾小管上皮细胞SnoN蛋白表达的影响 陆敏张悦△ 陆海英马骏都艳鹏 高海林 (上海中医药大学·上海201203) 摘要 目的：观察川芎嗪(TMP)对人肾小管上皮细胞smad转录共抑制因子SnoN蛋白表达水平的影 响。方法：体外培养人肾小管上皮细胞(HK一2)，应用MTT法检测不同浓度TMP以及转化生长因子一 blot法检测细胞裂解液中S∞N 母l(TGF—B1)、肝细胞生长因子(HGF)对细胞增殖的影响，应用w髓tem 蛋白表达水平。结果：与对照组比较，50∥rnl川芎嗪孵育HK一2细胞24小时可显著诱导细胞核中 s∞N蛋白的表达，与50n吕／IIllHGF诱导的s∞N蛋白表达水平没有明显差异(P0．05)，川芎嗪与HcF 联合用药后加入TcF—pI共刺激细胞，可明显抑制TGF—pI诱导的snoN蛋白的降解。结论：川芎嗪可 诱导HK一2细胞中S肿N蛋白表达，并且可能在阻断TGF—BI诱导的s肿N蛋白降解方面，与HGF具有 协同作用。 主题词川芎嗪／药理学 肾小管上皮细胞／药物作用 体外研究 川芎嗪是从活血祛瘀中药川芎的根茎中提取分离的生 个／IlII转种至培养板上，37℃恒温cO：培养箱中培养24小 物碱单体，化学结构为四甲基吡嗪(TMP)，临床与药理实验时，用无血清DME彬F12培养基同步化细胞24小时，进行 均显示，川芎嗪具有良好的抗纤维化作用¨。】。本课题组的 细胞因子和药物刺激。 体内研究显示，川芎嗪可降低左侧输尿管梗阻(uu0)模型2．2药物配制 以无血清DMEⅣF12培养基稀释盐酸川 大鼠肾组织中’IGF—B。含量，恢复肾组织中s咖d7和snoN芎嗪注射液，使其刺激终浓度为12．5、25、50、100、200、 蛋白表达水平，具有显著防治肾间质纤维化的作用”j。本研 究以HK一2细胞为研究对象，以公认的抗纤维化细胞因子 度为50ng／Inl。 2．3 HcF为阳性对照，在体外观察川芎嗪对snoN蛋白表达水平 HK一2细胞增殖检测MTr法。HK一2细胞按5× 的影响，进一步为临床运用川芎嗪防治肾间质纤维化提供理 104个／孔密度接种于96孔板上，培养24小时，同步化24小 论依据。 时，细胞因子和／或药物刺激24小时后，加入20一(5mg／Ⅱ11) l实验材料 M1’r工作液，培养箱中孵育4小时，取出弃去上清，每孔加入 1．1 细胞人源性肾小管上皮细胞株HK一2细胞：购于中 loo山DMs0，置摇床上充分震荡10分钟，用酶标仪在492咖 国典型培养物保藏中心。 处检测吸光度值，计算相对增殖率(细胞相对增殖率=各组 1．2药物盐酸川芎嗪注射液：上海现代哈森(商丘)药业0D值／正常组OD值×100％)。每组设4个复孔，重复检测 有限公司，批号：070613ll 3次。 1．3主要试剂与仪器TGF—Bl以及HGF：英国Pepmtech 公司；噻唑蓝(M1-r)：上海生工生物工程技术服务有限公司； 养液，细胞用D—Halll【’s液洗2次，每孔加入一定量的IuPA 二甲噩砜(DMs0)：国药集团化学试剂有限公司；兔抗大鼠 (含lOmM PMsF，2瞄／mlApro￡irIin)，反复吹打细胞5—10分 S∞N多克隆抗体：美国S鲫tacmz公司；辣根过氧化物酶偶 钟，冰浴20分钟，4℃，12000r／min，离心5分钟，收集上清。 联的小鼠抗兔GAPDH单克隆抗体：上海康成化学生物技术