酶联免疫吸附法在兽药残留检测中的应用.pdfVIP

酶联免疫吸附法在兽药残留检测中的应用 徐伟，程凤科，孟银，耿云，徐长亮，陈相宇，吴敏 (江苏省宿迁市农畜产品质量检测中心，江苏宿迁223800) 摘要：文章概述了酶联免疫吸附法的分类和特点，详细介绍了酶联免疫吸附法在兽药 残留检测中的技术要点，并结合实际使用情况对该法在兽药残留检测中的应用进行了综述， 表明该法在兽药残留检测快速筛选中有广阔的应用前景。 ． 关键词：酶联免疫吸附法；兽药残留；应用 动物性食品中兽药残留的检测方法主要有确 筛选时间。 2 证法(色谱法、质谱法)和筛选法(酶联免疫吸附法 ELIsA特点 (ELIsA)、胶体金试纸条快速检测法)。确证法一ELIsA具有以下特点：①灵敏度高：由于酶的 般需要大型仪器设备，具有检测成本高、前处理程 催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使 序较复杂、操作繁琐的特点，这些特点决定了其无 测定方法达到很高的敏感度；②检测限低：例如盐 法满足样品量大、时间要求紧的样品检测；而筛选 酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺检测限值一 法中胶体金试纸条快速检测法虽然检测时间短， 般在o．3～o．5斗g／k‘2|，可以有效防止假阳性或假 但由于检测限高、灵敏度差、假阳(阴)性率偏高， 阴性样品的出现，确保检测结果准确率；③检测样 难以保证结果的准确可靠性；而ELIsA由于其特品量大：每个试剂盒有96孔，按标准品和样品均做 异性强、灵敏度高、简便快速，加上所需仪器化程 平行计算，每个试剂盒可以一次性检测42个样品， 度低和样品前处理相对简单，适合于现场监控和 提高检测效率；④检测流程相对简单：组织样品 大批量样品筛选。 前处理时间约为2～3h，通过试剂盒检测时间约 1 ELIsA分类 为1．5h，尿液样品一般取清澈样本直接通过试剂盒 ELIsA分类众多，按其反应原理分主要有双 检测，时间约为1．5h，检测流程不复杂，便于操作。 抗体(抗原)夹心法、间接法、捕获法和竞争法…。 3 ELISA操作要点 兽药残留检测基本上采用的是竞争法，根据固相 稳定的试剂盒、成熟的方法、适宜的环境和 载体上包被物的不同和竞争类型不同，可以将竞 正确的操作是ELIsA取得准确可靠结果的前提 争法分为直接竞争法(包抗体)、间接竞争法(包抗保证。 原)和间接竞争法(包二抗)三种类型。随着ELIsA3．1试剂盒选择 技术不断发展和完善，在以前单参数测定的基础， 首先是要选用经过农业部备案的试剂盒，其 不断研发出了“多合一”试剂盒，如德国R—Bio—次要验证质量，对于同一种检测参数，市场上出现 pha衄的B一兴奋剂试剂盒，对盐酸克伦特罗、沙丁了国内外多种不同品牌的试剂盒，所以选用的试 胺醇、溴布特罗和溴代克伦特罗的交叉反应率均 剂盒要通过检测回收率等多方验证，保证试剂盒 超过100％；英国RANDox的氟喹诺酮类试剂盒 质量和效果稳定。 可以检测恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星等15个参 3．2操作环境 数，这种“多合一”试剂盒的研发大大缩短了样品 在ELIsA操作过程中，温度对吸光度值有很 大的影响，随着温度增高，微孔的吸光度值(oD 收稿日期：2013—05—06 值)会增大，有可能导致假阳性的出现，所以在检 一49— 万方数据 测过程中，试验操作环境条件要与使用要求相符： 溶液和拍干过程中要防止微孔之间的交叉感染。 一是试剂盒回温。大部分试剂盒保存的环境条 在要求的温度条件下按规定时间孵育，要防止溶 件是2~8℃，在使用前一定要回至室温(20～25℃)；剂蒸发，同时要