参环毛蚓肠上皮细胞重金属镉离子的耐受性研究.pdfVIP

广州中医药大学学报 2014年 1月第31卷第 1期 122 JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine January2014，Vo1．31，No．1 · 中药质量与控制 · 参环毛蚓肠上皮细胞重金属镉离子的耐受性研究 卢瑞珊， 李薇， 李菁， 龚玲， 马梅 (广州中医药大学中药学院，广州广东 510006) 摘要： 【目的】观察参环毛蚓肠上皮细胞 (IEC)对重金属镉离子 (cd2+)的耐受能力，探讨其耐受特性与广地龙药材重金属 超标的相关性 【方法】采用不同浓度Cd2+对参环毛蚓 IEC进行胁迫处理，分别利用台盼蓝染色法和噻唑蓝法测定细胞死亡 率和细胞活力，并借助显微镜观察与比较参环毛蚓IEC胁迫处理前后的形态变化。 【结果】IEC对cd：+的耐受特性主要表现 为：①未经孵育时IEC可耐受Cd2+的最高浓度为8tzmol／mL：②胁迫处理24h后 IEC可耐受cd的最高浓度为6．25x10 ~mol／mL：③胁迫处理48h时．IEC可耐受Cd2+的最高浓度为3．125x10 Ixmol／mL，上述3个浓度分别是 《中华人民共和国 药典》(2010年版)中地龙项下镉限量指标的2997．33、23．33和 11．66倍：@IEC对Cd2+的耐受性在一定的时间范围内与剂 量呈负相关。【结论】参环毛蚓IEC对重金属Cd2+具有较高的耐受性。Cd2+对IEC的毒性作用不是接触性的损伤，而有可能是 产生于细胞代谢过程 中。 关键词：参环毛蚓：肠上皮细胞：镉离子：耐受性 中图分类号：R282．7 文献标志码：A 文章编号：1007—3213 (2014)01—0122—04 参环毛蚓Pheretimaaspergillum fE．Perrier)属 的健康成蚓 经无菌超纯水清洗后．放人铺有湿润 钜蚓科动物，药材习称为 “广地龙”，是 《中华人民 无菌滤纸的烧杯中．在室温下避光吐泥48h以清 共和国药典》收载的4种动物来源之一 因其疗效 肠备用。 确切．临床作用广泛而被业内公认为品质最优者_1_ 1．2 实验仪器 CO一150CO，培养箱 (北京五洲 然而．地龙药材主要依赖野生资源．由于受到不同 东方科技发展公司)：LDZX一50FBS立式压力蒸汽 的野外环境以及采收加工条件等影响．质量极其不 灭菌器 (上海申安医疗器械厂)：VS一840—1洁净工 稳定．特别是重金属超标的问题一直难以控制，严 作台 (上海博讯实业有限公司医疗设备厂)：L一 重地影响了临床的用药安全 本课题组在前期整体 550低速自动平衡离心机 (长沙湘仪离心机仪器有 水平研究中曾发现参环毛蚓具有较高的重金属耐受 限公司)；Ⅸ51倒置显微镜 (日本 Olympus公司)； 现象 [。但一直未能在细胞水平上证实 前期研究 LDZX--50FAS酶标仪 (北京五洲东方科技发展有 也为此建立了参环毛蚓原代肠上皮细胞 (IEC)培 限公司)。 养体系 。本研究以该细胞体系为实验材料 ．通过 1．3 实验试剂 F12DMEM培养基 (美国Gibc0 IEC对镉离子 (Cd2+)的耐受性研究．获取 IEC的 公司，批号：C11330)：胎牛血清 (美国Gibco公 最大耐受浓度．为 日后深入研究Cdz IEC中的吸 司，批号：2027050)；青、链霉素溶液 (基诺生物 收、分布、转运积累的动态规律及机制奠定基础， 医药 。批号 ：15140)；2．5g／L胰酶溶液 (吉诺生 从而为今后制定降低或消除广地龙重金属超标的策 物医药。批号；CollagenaseTypeI(美 略提供实验依据．现报道如下 国Gibc0公司。批号：17100--017)：Therm0lysin(美