不同保存条件对中国蛤蜊总DNA提取及线粒体16SrRNA基因扩增的影响.pdfVIP

安徽农业科学 ，JournalofAnhuihgri．Sci．2010，38(3)：1169一l170，1195 责任编辑 张杨林 责任校对 卢瑶 不同保存条件对中国蛤蜊总DNA提取及线粒体 16SrRNA基因扩增的影响 刘晓玲，袁青，王敏强 (烟台大学化学生物理工学院，山东烟台264005) 摘要 [目的】初步探讨保存务件对 中国蛤蜊总DNA提取及线粒体 16SrRNA基 因扩增的影响。[方法]设置3种温度和4个时间点的 正交试验 ，对不同温度和不同时间保存的中国蛤蜊进行总DNA提取及检验，判断不同保存条件对线粒体 16SrRNA基因PCR扩增的影 响。I结果]中国蛤蜊在4、一20和 一40℃备件下保存7d，其DNA含量和PCR电泳条带检出率均无明显差异，说明7d内中国蛤蜊线粒 体基因的保存是完好的。20和28d的保存结果表明，在4、一20和一40℃条件下保存中国蛤蜊组织样的总DNA仍可 出现很亮的电泳 条带，但PcR结果则显示，线粒体 16SrRNA基因扩增效果不好。f结论 }若要利用中国蛤蜊总DNA作为模板扩增线粒体 16SrRNA基 因，最好能在 7d内进行。若需保存较长时间，应将样品放置在 一40℃或更低温度。 关键词 双因子正交试验 ；中国蛤蜊；16SrRNA；PCR扩增 中图分类号 $917 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2010)03—01169—02 EffectOfDifferentConservingConditionson theExtraction ofToralDNA from M actra ch e／its／sPhilippiand theAmplification of M itochondrion16SrRNA Gene LIUXiao-lingetal (ChemistryandBiologyCollege，YantaiUniversity，Yantai，Shandong264005) Abstract f0biectivelThestudyaimedtoprimarilydiscussthedifferentconservingconditionsonextractionoftotalDNA fromMactra chinensisPhilippiandamplificationofmitochondrion16SrRNA gene．1MethodlT}1eorthgonalexperimentwith3kindsoftemperatureand4 timepointswassetuptomaketheextraction anddetection oftotalDNA from M．chinensisconservedatdifferenttemperatureanddifferent timesanddeterminetheeffectofdifferentconservingconditionsonthePCRamplificationofmitochondrion16SrRNAGene．1ResuhlWhen M chinensiswasconservedfor7dat4．一2Oand 一40℃ ．theirDNAcontentsandthedetectableratesofPCRelectrophoresisbandhadno obviousdifference．indicatingthatthemitochondriongeneof chinensiswaswellinconservationwithin7d．Theconservationfor20and28 dshowedthat．when chinensiswasconservedat4．一20and 一40 ℃ 。thetotalDNAfromthetissuesamplesstilloccurredtheverybright electrophoresisbands．buttheirmitochondrionl6SrRNAPCRamplificationeffectsweren’tgoodaccordingtothePCRresults．1Conclusion] IftotalDNA ofM．chinensiswasusedasthetempletoamplifythemitochondrion16SrRNA PCR geneitshouldbedonewithin7dandifthe tissuesampleneededt