抗真菌α-硫堇蛋白DB4基因导入苹果的研究.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2010，38(3)：1147—1148 责任编辑 姜丽 责任校对 卢瑶 抗真菌 Or硫堇蛋 白DB4基因导入苹果的研究 孙春玉 ，孙呖，魏海蓉 ，宗晓娟 ，刘庆忠 (1．山东省果树研究所 山东省果树生物技术育种重点实验室，山东泰安 271000；2．吉林农业大学生命科学学院，吉林长春 130118) 摘要 [目的]利用转基因的办法提高苹果(MalusodmesticaBorkh)对叶部病害和幼果期侵染果实病害的抵抗能力。[方法]利用农杆 菌介导的遗传转化方法将绿色组织特异表达的菠菜核酮糖二磷酸羧化酶／加氧酶的激活酶 (Rubisco，aetivase)启动子 (RCAP)驱动下的 Ot一硫堇蛋白DB 基因转入到 “皇家嘎啦”苹果叶片外植体中。[结果]PCR、Southemblotting分析及GUS检测结果表明，目的基因已经整 合到苹果基因组上。[结论]获得 了转o[一硫堇蛋白DB4基因的转基 因苹果。 关键词 d一硫堇蛋 白；抗真菌；转基因苹果 中图分类号 S661．1 文献标识码 A 文章编号 0517—661l(2010)03—01147—02 StudyontheTransgenicRoyalGalaApple(MalusdomesticBorkh)、vitllAntifungala-thioninDB4Gene SUN Chuny·uetal (KeyLaboratoryforFruitBioteehnologyBreedingofShandongProvince，ShandongInstituteofPomology，Taian， Shandong271000) Abstract [Objective]Theresearchaimedtoimprovetheresistancetoleafplantdiseaseofapple(MalusdomesticBorkh)bytransgenic method．[Method]ByusingAgrobaeterium—mediatedtransformationmethod，theputativetransgenie “RoyalGala”applewithantifungal(3-／一 thioninDB4genewhichdrivenbygreenspecificspinachribulosebisphosphatecarboxylase／oxygenase(urbiseo)aefivasepromoter(RCAP)was obtained．[Result]PCR，SouthernblottinganalysisandGUSassayconfirmedthatd—thioninDB4genehadbeenintegratedinto“RoyalGala” apple．[Conclusion]Thetransgenicappleintergatedwithantifungald—thioninDB4genewasobtained． Keywords d一血ionin；Antifungus；Transgenicapple 目前，我国苹果生产中所采用的主要是富士系、红星系及 的激活酶(Rubisco—aetivase)基 因的启动子驱动 目的基因表 嘎啦系品种，但这些品种普遍存在的缺点是不抗真菌病害。人 达。将构建好的基因克隆到 pGV双元载体内，然后转化到 工防治这些病害，使果品生产成本极大提高；同时农药的大量 根癌农杆菌 EHA105中。 施用又造成了环境污染，而且农药在果品中的残留严重影响人 1．3 共培养与转基 因植株再生 农杆菌在不含琼脂 的 类的健康。目前，利用基因工程将抗病基因转入植物当中以增 YEB培养基 (200r／min，28℃)上生长 1d后，5000r／min离 强植物的抗病性已有很多有益的尝试 -61。 ：硫堇蛋白啦 心提取细菌 ，在液体培养基中进行悬浮培养，液体培养基为 基因是大麦叶内富含半胱氨酸的一种抗真菌多肽类化合物。 N 大量元素、Ls微量元素，附加 0．56~mol／L肌醇、3．00 为此 ，笔者将DB4基因置于绿色组织特异表达的菠菜核酮糖