维生素A对Hela细胞凋亡的影响.pdfVIP

山东医药2010年第 50卷第 1期 维生素A对 Hela细胞凋亡的影响 薛延军 。邵世和h。李先茜 。段秀杰’ (1江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏镇江212013；2上海市普陀区中心医院； 3江苏大学附属医院) 摘要：目的 研究维生素A对Hela细胞凋亡的影响。方法 应用光学显微镜、电子显微镜观察维生素A对 Hela细胞凋亡形态的影响；分别应用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞仪分析维生素A诱导Hela细胞凋亡 的生物化学特征、细胞特征及凋亡细胞百分率。结果 光学显微镜下可见凋亡小体；电子显微镜下可见细胞固缩 ， 核膜扭曲，核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征；在琼脂糖凝胶电泳中由于细胞 DNA被降解而呈现典型 的 “阶梯状”图谱；流式细胞仪检测结果显示二倍体核型的特征，在DNA直方图上，G。峰左侧出现亚二倍体细胞群 的峰型；维生素A诱导Hela细胞凋亡具有时间依赖性。结论 维生素A可诱导Hela细胞凋亡。 关键词：维生素A；Hela细胞 ；细胞凋亡 中图分类号：R737．33 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2010)01-0034-02 维生素A为一种脂溶性维生素，具有调节和控 于含3块盖片的培养皿中，37℃，5％CO孵箱中培 制多种正常组织和上皮细胞增殖分化等多种生物学 养，于对数生长期时加人维生素A，使维生素A终浓 活性，特别是与肿瘤的发生、发展密切相关。本课题 度为8 g／ml，同时设对照组(不加维生素A组)，每 组前期发现维生素A对 Hela细胞有抑制作用，且以 个组3个平行片。37℃，5％CO 孵箱中继续培养 8 g／ml作用最佳，并将此浓度作为后面各项研究 48h取出盖片 ，37oCPBS洗 2次 ，醋酸甲醇固定 3O 的实验浓度。2008年 3—11月，本文从细胞凋亡角 min，加瑞 氏染液染 1min后，用姬姆萨染液与磷酸 度探讨了维生素A抑制Hela细胞生长的作用机理。 缓冲液 1：9混合染 10min，流水冲洗干净，晾干，二 甲苯透明，光学树脂封片，在光学显微镜下观察细胞 1 材料与方法 形态。收集经8I．~／ml维生素 A处理 48h的HeLa 1．1 材料 维生素 A 由美 国Sigma公司提供； 细胞，PBS洗两次，加 3％戊二醛固定 3h，PBS洗 2 RNase、蛋 白酶K、RPMI．1640、胎牛血清、NP-40等购 次，锇酸固定，树脂包埋、染色、上镜观察并照像。 自Gibco公司；Hela细胞系(人宫颈癌细胞系)由中 1．2．3 细胞 DNA提取及 电泳观察 Hela细胞凋亡 国医学科学院中国协和医科大学基础所细胞生物室 的生物化学特征 收集经 8 g／Illl维生素 A处理 提供。显微镜摄影系统 BH2(日本 Olympas)；倒置 48h的 Hela细胞离心 l000r／min5min，用含 2 显微镜 (日本 CK一32PHOlympas)；水平电泳系统(北 reotol／LEDTA 的PBS洗 2次 ，加 0．3mlTBE(45 京)；电子显微镜 JEM-2000(美国EXI)；流式细胞测 mmol／LTris—Hcl，pH8．7，1mmol／LEDTA)，0．25％ 定仪 I~ectonDickinsonFACS420(美国)。 NP-40及RNase(终浓度 l0g／L)混匀，3