过量维A酸致昆明小鼠腭裂动物模型的建立及意义.pdfVIP

14 JBengbuMedCoil，January2010，Vo1．35，No．1 [文章编号]1000—2200(2010)01-0014-03 ·基础 医学 · 过量维 A酸致昆明小 鼠腭裂动物模型的建立及意义 尹海燕 ，刘 凯 。卓煜娅’，刘 桐 。孙美群 。邹维艳 [摘要]目的：建立维A酸诱导的发生率较高、易于获得并可用于腭裂发生机制研究的动物模型。方法：采用致畸物全反式维 A酸 (atRA)作用于昆明小鼠(对照组采用等剂量溶剂)，观察不同剂量和不同给药时问的胚鼠腭裂畸形发生率及腭部组织的 光镜结构特点，确定诱导腭裂发生的最佳作用条件。结果：在孕 10天给予80mg／kg剂量atRA诱导昆明小鼠腭裂发生率最高 为 100．0％(P0．01)，为理想的腭裂动物模型，光镜结果显示，atRA诱导的腭裂为小腭。结论：成功建立了atRA致腭裂发生 分子机制研究的动物模型，为进一步研究腭裂畸形的分子机制奠定了基础。 [关键词]维A酸；腭裂；动物模型；小鼠 [中国图书资料分类法分类号]R986；R782．22 [文献标识码]A 先天性腭裂的发病机制复杂，致病因素多样，一 atRA芝麻油悬液，剂量均为80mg／kg。另外两组则 般认为是一种多基因易感性疾病 ，现被大多数学者 分别与GD10天下午 1时一次性灌服 atRA芝麻油 认为是基因和环境联合作用引起，其发病机制 目前 悬液，剂量分别为 60mg／kg和 100mg／kg。对照组 尚未明确。稳定的腭裂动物模型对研究人类腭裂的 6只，再随机分为3个小组，每组 2只，分别于GD8、 形成原因、演变机制及预防具有重要意义。通过对 GD10和 GD12天下午 1时一次性灌服与实验组等 一 些化学药物产生腭裂的研究，已能初步指出和解 剂量的芝麻油。 释腭裂的发生及其致畸机制…。本实验拟通过在 在 GD16天颈椎脱 臼处死实验组和对照组母 特定妊娠时期给予昆明小 鼠全反式维A酸(atRA)， 鼠，从子宫内取出胚胎，解剖显微镜下对胚胎进行观 通过对胚胎发育的渐进性形态学观察 ，揭示腭发育 察，确定有无腭裂畸形。计数胚胎总数、腭裂胚胎 及腭裂形成过程 ，为后续化学物致畸分子机制的研 数，计算腭裂的发生率。部分实验组和对照组GD16 究提供基础。 日龄胎鼠，用4％多聚甲醛固定，常规组织处理后仔 细切除躯干部，小鼠喙部向下，制备石蜡切片，切片 1 材料与方法 时以麦克尔软骨为基准面，作冠状位连续切片，片厚 1．1 实验动物 成年未经产雌性昆明小 鼠，体重 5 m，最后裱片于APES处理过的载玻片上，常规 25～35g，购 自山东大学实验动物中心。 HE染色，光镜下观察腭部组织结构。上述实验确 1．2 试剂 80mg／mlatRA，芝麻油悬液 (atRA购 定 atRA致昆明小 鼠腭裂畸形的最佳用药时间和用 自美国Sigma公司，芝麻油为市售优质品)，临用时 药剂量。 配成0．8％混悬液。 1．4 分组与标本制备 按上述方法获取孕 鼠32 1．3 动物模型建立方法 健康成熟未经产雌性昆 只，随机分为实验组和对照组，每组 16只，按照步骤 明小鼠80只，常规饲养，颗粒食料，自来水饮水，明 1．3确立的atRA最佳给药时问和给药剂量，实验组 暗周期各 12h，室温20～22qC。下午6时小鼠按雌 孕鼠于GD10天下午 1时，按 80mg／kg剂量，一次 雄 2：1合笼，第 2天早上阴栓 阳性者为孕天数