猪流感病毒聚合酶PBl蛋白亚细胞定位的研究.pdfVIP

动物医学进展 ，2010，3l(1)：21—23 ProgressinVeterinaryM edicine 猪流感病毒聚合酶 PB1蛋白亚细胞定位的研究 王晓杜 ，陈培君 ，沈 阳，马志永 (中国农业科学院上海兽医研究所 ，上海 200241) 摘 要：猪流感病毒 PB1蛋 白在其复制 中起着转录作用，是病毒复制所必需的蛋白。克隆了猪流感病 毒的PB1基 因，构建重组真核表达载体 p3xFIAG—CMV～7．卜PB1，利用脂质体转染 Vero细胞后 ，分别用 Westernblot和 IFA检测重组蛋 白FIAG—PBI蛋 白的表达 ，结果表明重组蛋 白能在真核细胞 中得到表达， 其亚细胞定位为细胞核表达，与其功能密切相关，为以后流感病毒的相关研究打下 了基础 。 关键词 ：猪流感病毒；PB1蛋白；亚细胞定位 中图分类号：$852．659．5,$858．28 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2010)01—0021—03 流感病毒属于正黏病毒科负链 RNA病毒，自从 究中具有重要作用，同时也应该在跨种间传播中发 1918年发生西班牙大流行 以来 ，在全世界多次出现大 挥重要功能 。本研究克隆猪的 H3N2亚型流感病毒 流行 ，2009年发生在墨西哥的甲型 HIN1流感病毒 ， PB1基因全长 CDS区，真核表达 PB1蛋 白，间接免 是含有猪源流感病毒的三元重配病毒，已经传播到世 疫荧光观察 PBI蛋白的亚细胞定位，为利用PB1蛋 界各地，2009年 6月 12日世界卫生组织把警戒级别 白作为抗病毒药物靶标分子的研究，以及研究流感 提高至 6级 ，预示着流感 的再次大流行 ，感染对象 由 病毒人侵宿主后的机制等相关工作做了前期研究。 老人和儿童转向对青壮年的高致病性，在流行病学上 1 材料与方法 的变化，进一步体现了流感病毒 的强变异性 。研究流 1．1 材料 感病毒的复制机制。寻找预防和治疗流感 的疫苗和药 猪流感 病 毒 (InfluenzaA／Swine／Jiangsu／2／ 物，是当务之急。流感病毒 的复制是 3个 P蛋 白和 2006／H3N2)、大肠埃希菌 DH5a、Vero细胞、MD— NP蛋白形成复制酶复合物，相互协同作用发挥 RNA CK细胞、真核表达质粒 p3xFLAG-7．1由中国农业 的复制作用，同时可以与病毒基因组 RNA结合形成 科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室保存和 RNP，是病毒复制和包装所必需的1【]。单一决定 3个 提供。AMV反转录酶 、PCR扩增用 Taq酶 、各种限 聚合酶基因的毒力是非常困难的，但是不同物种来源 制性内切酶、T4连接酶、T载体试剂盒购 自宝生物 的病毒聚合酶基 因，其物种复制能力有较大差异，这 工程 (大连)有限公司。质粒抽提和 DNA 片段 回收 些可能是流感病毒跨物种传播的机制之一。 试剂盒购 自博大泰克生物技术公司。DMEM 和胎 流感病毒 的PB1蛋 白由病毒基 因组片段 2编 牛血清购于 Gibco公司。lipofectamine-2000购于 码 ，由757个氨基酸组成 ，具有聚合酶活力的蛋 白。 invitrogen公司。羊抗小 鼠FLAG抗体购于 Sigma 病毒的RNA聚合酶是 由PB1、PB2、PA蛋 白形成的 公司。