人尿路变移上皮种子细胞的体外培养与鉴定.pdfVIP

山西医科大学学报 (JShanxiMedUniv)2010生 旦 (! · 27 · 人尿路变移上皮种子细胞的体外培养与鉴定 谷 超 ， 李 静 ， 隋志芳 ， 畅继武 (天津医科大学基础医学院生物学教研室，天津 300070； 天津医 科大学第二医院泌尿外科研究所) 摘要： 目的 对人尿路变移上皮细胞进行原代和传代培养，探讨并建立细胞的培养体系，用于泌尿系统组织工程种子细胞 的相关研究。 方法 采集人。肾脏手术标本的。肾盂、输尿管正常上皮组织利用组织块法，使用添加附加表皮生长因子 (EGF) 及牛垂体提取物 (BPE)成分的角朊细胞无血清培养液 (KSFM)进行细胞原代培养，用含EGF及BPE的KSFM进行传代培养。 观察培养细胞的形态和增殖情况，经HE染色和免疫细胞化学 sP法染色进行鉴定。 结果 培养制备的人尿路上皮细胞呈 现典型的变移上皮细胞形态特征，原代培养9—12d时细胞汇合可达80％。免疫细胞化学染色显示细胞角蛋白(CK 驺)阳 性。分离培养的为单一的人尿路变移上皮细胞 ，无成纤维细胞混杂。 结论 采用组织块法分离培养的人尿路变移上皮细 胞在添加EGF及BPE的KSFM培养液中可维持良好的生物学特性 ，并具有一定的增殖传代能力。该培养体系所获得的细胞 可用于人泌尿系统的基础研究及组织工程 的进一步研究。 关键词： 人尿路上皮； 变移上皮细胞； 细胞培养； 组织工程 中图分类号： Q813．1 文献标志码 ： A 文章编号： 1007—6611(2010)01—0027一O3 CultureinvitroandidenfificafionofhumanurinarytransitionalepithelialceHs GUChao，I2Jing，SUIZhi—fang，CHANGJi—wu(DeptofBiology，BasicMedciineCollegeofTianjinMedcialUniversity， 0面n 300070，China；InstituteofUrinarySurgery，SecondHospitalofTianjinMedicalUniversity) Abstract： Objective Toexploretheprimaryandsecondcultureconditionsofhumna transitionalepithelialcellsforfurtherresearch ontissueengineering． Methods Cellsofurothelium from therenalpelvisandureterofhumankidneysurgeryspecimenwerecultured bytissueexplantmethodswithkeratinocyteserumfreemedium(KSFM)withadditionalcomponent，bovinepituitaryextract(BPE)and epidermalgrowthfactor(EGF)．Theprimary．cellswereidentifiedbycellmorphology，HEandimmunoeytochemicalSPstaining． Results Theculturedhumanurothelium cellspossessedatypical morpholog％al featureoftransitionalepithelial cellsandtheireonflu— enceattachedto80％ atday9— 12 afterprimary culture．By immunoeytoehemistry，cultured cellsshowedcytokeratin AE1／AE3 ． (CKAEl／^E3)positive．Culturedcellswerepurehumanurinarytransitionalepithelialcellswithoutfibroblasts． Conclusoin Purehuman urinarytransitionalepithelial cellscanbeculturedsuccessfullybytissueexplantmethodusingKSFM withEGFandBPE，andretain thebiologicalp