小G蛋白及MAPK在脂蛋白（a）促血管平滑肌细胞迁移中作用研究.pdf

复旦大学博士论文 中文摘要 小G蛋白及MAPK在脂蛋白(a) 促血管平滑肌细胞迁移中作用的研究 摘要 第一部分脂蛋白(a)诱导的细胞骨架构建及其促血管平滑肌细胞迁移 目的：碲湖旨蛋白(a)所诱导的人血管平滑肌细胞的迁移及细胞骨架构建变化。方 法：本研究用不同浓度的脂蛋白(a)[Lp(a)】诱导原代培养的人血管平滑肌细胞 同时间点用免疫荧光标记与细胞运动有关的肌动蛋白细胞骨架结构，激光共聚焦 显微镜观察人VSMC细胞骨架构建变化情况。结果：Lp(a)的终浓度从4099／ml 诱导VSMCl0分钟后，激光共聚焦显微镜观察，可见细胞内出现张力纤维和粘 着斑，并可见丝状伪足；20分钟后张力纤维和粘着斑明显增多；30分钟后细胞 内的张力纤维和粘着斑较20分钟时无明显变化。结论：Lp(a)诱导后VSMC细胞 骨架构建出现规律性的变化，从而导致VSMC的迁移。 关键词： Lp(a)人血管平滑肌细胞丝状伪足张力纤维粘着斑细胞迁移 第二部分RhoA及Racl介导的脂蛋白(a)促血管平滑肌细胞迁移作用 blot检测RNA干扰效果，激 再用Lp(a)诱导阻断后的细胞，RT-PCR和Western 光共聚焦显微镜观察细胞骨架构建变化，迁移试验观察VSMC迁移数量的变化。 细胞，激光共聚焦显微镜观察细胞骨架构建情况，迁移试验观察VSMC迁移数 量的变化。结果：RT-PCR和Westernblot检测均显示RaclsiRNA干扰效果明显， Lp(a)诱导20分钟后，激光共聚焦显微镜观察，细胞内未见明显的张力纤维、粘 为77．20_+7．46个，Racl 复旦大学博士论文 中文摘要 诱导20分钟后，细胞内未见明显的张力纤维、粘着斑及丝状伪足。C3转移酶组 细胞迁移依赖于Racl及RhoA的生物学活性。 RhoA RT-PCRWesternblot 关键词：Racl RNA干扰 C3转移酶 第三部分ERK及p38在脂蛋白(a)促血管平滑肌细胞迁移中的作用 目的：研究ERK及p38在Lp(a)诱导的VSMC细胞骨架构建及迁移中的作用。 blot 检测P—ERK及P—p38的表达，激光共聚焦显微镜观察细胞骨架构建变化，迁移 试验观察VSMC迁移数量的变化。结果：Westernblot检测显示PD98059的终浓 随其终浓度的逐渐升高，P—ERK的表达逐渐降低(P0．叭)，达到409mol／L后， 细胞内未见明显的张力纤维、粘着斑及丝状伪足。对照组VSMC迁移细胞数为 p38的活化。 关键词：ERKp38PD98059SB202190 复旦大学博士论文 英文摘要 ontheActionofSmallGProteinsandMAPKinasetoVascular Study SmoothMuscleCell Stimulated Migration by Lipoprotein(a) ABSTRACT Partone andceH inhuman reorganization Cytoskeleton migration vascularsmoothmusclecellstimulated