草鱼肌肉生长抑制素（MSTN）-1基因的克隆、表达、.docVIP

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2017-08-24 发布于上海
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草鱼肌肉生长抑制素（MSTN）-1基因的克隆、表达、.doc

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草鱼肌肉生长抑制素(MSTN)-1基因的克隆、表达、反义抑制及过量表达对胚胎发育的影响濮剑威, 沈睿杰, 邹曙明上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海 201306 摘要: 肌肉生长抑制素（myostatin, MSTN）是抑制肌肉生长和发育的重要生长调控因子。本文通过cDNA末端快速扩增法（RACE）克隆了草鱼MSTN-1全长cDNA，其全长为2190bp，开放阅读框长度为1128bp，可编码375个氨基酸，C端具有9个保守的半胱氨酸残基和RIRR的蛋白酶水解位点。序列比对显示，草鱼MSTN-1与斑马鱼MSTN-1的相似度高达96%，存在很强的进化保守性。RT-PCR结果分析表明，该基因在草鱼胚胎发育过程的各时期均有表达，但在胚胎后期表达较高；其在不同组织中的表达量存在较大差别，在眼、脑、骨骼肌中表达量较高，在肝、脾、心中表达量相对较低，而在性腺、鳃、肾和肠中无表达。整胚原位杂交结果显示，该基因不同时期表达存在比较明显差异，在20hpf时期主要在脊索区域表达，28hpf时期则在头部和尾部有表达，36hpf时期在头部和脊索就较高的表达量。通过显微注射MSTN-1 反义mRNA至草鱼1-2细胞期胚胎，结果显示，MSTN 反义mRNA可导致草鱼体节发生期胚胎脊柱出现北部肌肉增生，出现双脊柱现象，肌肉发育畸形明显。而通过显微注射MSTN-1 mRNA至斑马鱼胚胎，导致胚胎发育异常，体节发育受到强烈抑制而不分化等现象，通过整胚原位杂交表明在11h时相，肌节处MyoD基因表达紊乱，导致肌节分化出现异常。关键词: 草鱼；肌肉生长抑制素；Myostatin；MSTN；过表达; 反义RNA 基金项目：国家高技术研究发展计划(863计划)项目(编号：2009AA10Z105)和公益性行业科研专项(编号：200903045) 通讯作者：邹曙明, 男, 教授, 研究方向：鱼类遗传育种。E-mail: smzou@shou.edu.cn