由一株放线菌产生的抑制VCAM-1表达的活性物质研究_药学论文.docVIP

由一株放线菌产生的抑制VCAM-1表达的活性物质研究_药学论文 由一株放线菌产生的抑制VCAM-1表达的活性物质研究_药学论文 【摘要】 以VCAM-1为靶位点，使用含有荧光素酶报告基因的转染细胞株筛选模型从微生物的代谢产物中高通量筛选能够抑制VCAM-1表达的生物活性物质，以期找到能够治疗诸如类风湿性关节炎等免疫性疾病的新型药物。在筛选过程中使用有机溶媒萃取、ODS反相柱层析、HPLC制备等方法，从一株放线菌来源的发酵液中分离到了一个对测活用细胞株的荧光素酶报告基因的表达有较强抑制作用的化合物，其IC50为10.8μmol/L，经理化性质及NMR分析确定该化合物与文献报道的glucopiericidin A同质。 【关键词】 VCAM-1； Glucopiericidin A； 抗炎症剂； 荧光素酶 ABSTRACT Focused on the VCAM-1 as the research target, we used a stable transfected cell line carrying the luciferase report gene in high throughput system to screen bioactive compound that prevent the expression of VCAM-1 for searching new drugs of treating immunological diseases such as rheumatoid arthritisr from the metabolites of microorganisms. In the course of screening, one active compound was isolated from the mycelium of actinomycetes by solvent extraction, ODS column chromatography and HPLC purification etc. This compound showed moderate strength inhibitory activity against the luciferase report gene expression of the assay cell line and the IC50 is 10.8 μmol/L. The structure of this compound was elucidated to be identical with glucopiericidin A by means of physico-chemical properties and NMR analysis. KEY WORDS VCAM-1; Glucopiericidin A; Antiphlogisties; Luciferase 黏附分子(adhesion molecules)是涉及细胞-细胞、细胞-细胞外基质间相互识别、相互作用的一类表面大分子受体蛋白，它广泛分布于多种细胞表面，通过与相应配体的特异性结合影响多种病理、生理过程如炎症反应、创伤愈合、肿瘤发生与转移及细胞分化等。目前已经发现的黏附分子主要分为三大类即整合素(integrins)、选择素(selectins)及免疫球蛋白超家族分子(member of the immunoglobulin)。其中白细胞表面的整合素和选择素主要调节循环细胞与内皮的黏附，而内皮细胞上的整合素和免疫球蛋白超家族成员则主要调节内皮对白细胞的黏附［1］。与黏附有关的免疫球蛋白超家族分子最重要的有两种， 它们是ICAM-1(intercellular adhesion molecule-1)和VCAM-1(vascular cell adhesion molecule-1)［2］，其中ICAM-1的表达是组成性的，即在通常状态下细胞表面就有一定程度的表达；VCAM-1的表达是非组成性的，即在通常状态下细胞表面表达很少或不表达［3］。VCAM-1在细胞因子(如TNF-α、IL-1β等)或内毒素的刺激下表达于内皮细胞、上皮细胞及树突状细胞的表面，可介导与白细胞与内皮细胞的黏附，引导炎症反应由急性期转向慢性期的过度阶段单核细胞和嗜酸性细胞的集聚［4，5］。 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)为对人类健康影响较大的一种常见病，目前尚无理想的特效治疗药物。该病最重要的病理特征是持续存在的滑膜炎，其表现为滑膜组织中炎性细胞的大量浸润和微血管数量的明显增多，这些炎性细胞在类风湿性关节炎的发病过程中起着重要的作用，而包括ICAM-1和VCAM-1在内的细