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真皮替代物移植后的血管化过程及组织学变化的实验研究 发布时间：[1970-01-01] 中华烧伤杂志 2005年2月第21卷第1期 真皮替代物移植后的血管化过程及 组织学变化的实验研究 谢卫国，谭红，赵超莉，王晖 【摘 要】 目 的：了解不同种类真皮替代物移植后的血管化过程及组织学变化。 　 方 法：将21只SD大鼠根据其皮下埋植不同的真皮替代物分为猪脱细胞真皮基质(sADM)组、人脱细胞真皮基质(hADM组)及人工真皮(Integra)组。于埋植后2、3、4、7、10、14、21、30、60、90、120、150、180 d行移植物大体观察，采用免疫组织化学法观察移植物的血管化过程及组织学变化。 　 结 果：大体观察：术后各组大鼠创口周围皮肤无明显红肿及炎性反应，切口愈合良好，移植物与创面接触紧密。90d后各组移植物不易从体表触及。180d时，部分移植物面积缩小、厚度变薄甚至难以辨认。组织学观察：移植术后2d起可见成纤维细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等侵入移植物内，3d时与受床组织连接处可见长入的新生毛细血管芽。30-60d，移植物内形成丰富的血管网。150d后近似正常真皮结构。180后部分移植物有不同程度吸收退化。 　 结 论：3种真皮替代物移植后均能很快建立与受床组织的血液循环，并长时间存留于创面，但有一定程度的吸收退化。 关键词 皮肤，人工；真皮；移植；组织工程 在大面积Ⅲ度烧伤患者皮肤缺损的修复中，真皮的重建对于提高创面愈合质量、保证永久性创面覆盖具有至关重要的意义[1]。目前真皮重建主要有2个途径，一是采用天然皮肤材料，去除所有活细胞成分仅保留真皮支架，称为脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix，ADM) [2]；另一方法是利用胶原等材料人工合成真皮类似物[3]。不管是采用哪种材料，真皮移植后的血管化过程及转归都关系到其移植成活率，同时也决定着成活后的功能状态，影响到最终治疗效果。笔者采用目前国内外具有代表性的3种真皮替代物，通过大鼠皮下埋植，观察植入后的血管化过程及组织学变化，以期为ADM的临床应用提供理论和实验依据。 一、材料与方法 1． 真皮替代物的来源及制备： 1.1 猪脱细胞真皮基质(swine acellular dermal matrix，sADM)的制备：将50kg的健康小白猪(湖北省医院实验动物中心)处死后剥取全厚皮肤，用取皮机反取成中厚皮片厚度为0.3~0.4mm)。用体积分数0.1%的新洁尔灭溶液浸泡15min。浸入2.5g/L胰蛋白酶中，4℃、24h后揭去表皮，以Triton-X 100浸泡并置摇床以100r/min摇震48h，置入体积分数0.2%戊二醛15min。磷酸盐缓冲液(PBS)充分漂洗后剪成适当大小，封装于聚丙烯塑料袋，置4℃备用。 1.2 人脱细胞真皮基质(human acellular dermal matrix，hADM)：购自北京桀亚莱福生物技术有限责任公司。临用前无菌状态下取出，PBS 冲洗3遍后备用。 1.3 人工真皮：Integra人工皮(简称 Integra)由美国Integra LifeScience公司惠赠。临用前揭去其表层硅膜。 1.4 真皮替代物性状：sADM与hADM在外观上大致相同，均呈磁白色，柔软，有一定弹性，但sADM韧性稍大，色泽微黄。Integra真皮面为海绵状，柔软，吸水性强。显微镜下可见sADM与hADM的结构相似，呈多孔隙、疏松、均质、淡红色为主的结构，但后者稍致密，在真皮表皮面可见薄层基底膜和波浪起伏的乳头结构。镜下见Integra呈淡红色条状疏松海绵状结构。 2． 真皮替代物移植：雌性SD大鼠(湖北省医院实验动物中心)21只，体重200~250g，根据其皮下埋植不同的真皮替代物分为sADM组、hADM组及Integra组，每组7只。术前2d用80g/L硫化钠脱毛。以30g/L戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉。于背部切开皮肤，在深筋膜与肌膜之间向一侧分离形成囊腔。分别植入5cm×5cm的各种真皮替代物，其四角各缝1针贯穿至皮外，结扎后留线作为后期取样标志。切口原位缝合并包扎，每日观察，10d左右拆除切口缝线。 3． 移植物大体观察及组织标本观察：术后动物分笼饲养。于移植后2、3、4、7、10、14、21、30、60、90、120、150、180d 行移植物大体观察，并以皮肤取样器取组织活检，HE及免疫组织化学染色后于镜下观察。30d后因体表缝线标记脱落，为确保取样准确，采用切开直视下取样。记录移植物的面积、厚度、质地及色泽变化。 二、结 果 1． 大体观察：所有实验大鼠在麻醉复苏后即可自由活动，精神、食欲如常。术后创口周围皮肤无明显红肿及炎症反应，切口愈合良好，移植物与创面接触紧密