绵羊肺腺瘤病毒长末端重复序列细胞嗜性的研究.pdfVIP

全国兽医病理学、动物病理生理学学术会议论文集 绵羊肺腺瘤病毒长末端重复序列细胞嗜性的研究 罗军荣1’+，武志红1，高华1，周建华2，马学恩q (I内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特010018；#共同第一单位江西农业大学动科院，南昌330045； 2中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨 150001) 不同细胞内的萤光素酶活性，结果表明除肺泡II型上皮细胞外，内外源性JSRV．LTR在各细胞内的启动子活性相差较 JSRV．LTR在肺泡II型上皮细胞内的启动子活性下降约60％～70％，说明这两个转录因子结合位点，对绵羊外源性 JSRV．LTR在肺泡II型上皮细胞内的特殊嗜性具有重要作用。 关键词：绵羊肺腺瘤病毒；长末端重复序列；双萤光素酶报告系统；启动子活性；细胞嗜性；转录因子结合位点 经过漫长的研究探索，反转录病毒JSRV作细胞上大量分布，因而，限制JsRv仅在肺肿瘤 为绵羊肺腺瘤的原发性病原已是不争的事实，该 细胞内增殖表达的因素不是细胞存在受体与 病毒对肺泡II型上皮细胞和无纤毛细支气管上 否，而可能是病毒仅能在表达与JSRVLTR增强 皮细胞具有特殊嗜性。感染羊后形成整合有外源 子元件相互作用的转录因子的细胞内高效增 殖。为了证实这一推断，本研究分别以内外源 性前病毒DNA(exJSRV)的肺肿瘤细胞。有趣的 是，健康羊基因组携有不少于27拷贝，与JSRV性JSRv．u1R作为启动子，构建了萤光素酶报告 质粒以比较内外源性JSRv．LTR在不同细胞内 密切相关的内源性病毒DNA(eIlJSRV)。enJSRV 是几百万年前，JSRV形成前病毒DNA整合入羊的活性差异，了解外源性JSRV-LTR的细胞嗜 受精卵细胞，在羊与病毒漫长的共进化过程中固 性，并有选择地突变转录因子结合位点，检测 定下来，随宿主细胞基因组遗传复制并发挥一定 其对活性的影响。 的生理功能。 1材料 一般而言，囊膜基因与LTR是决定反转录 1．1质粒双萤光素酶报告系统质粒 病毒细胞嗜性的两个主要因素，前者编码的病 毒糖蛋白能特异性地与靶细胞的受体结合，使 建华研究员惠赠，质粒图谱见图1；山羊内源性 得病毒粒子得以进入细胞内并增殖：后者包含 有病毒的启动子和增强子元件，影响病毒的细 pMD．S5，绵羊外源性JSRV．LTR： 胞内转录。文献表明JSRV的受体Hyal．2在多种pMD．China—LTR2由本研究组克隆。 图1 pGL3．Basic、pRL-CMV质粒图谱 of and 1 Plasmid Figure mappGL3··BasicpRL·-CMV }通讯作者：E—mail：xueen．ma@163．tom 全国兽医病理学、动物病理生理学学术会议论文集 1．2主要试剂与仪器ExDNA聚合酶、 Taq 究组构建的质粒pMD—G3、pMD—S5、 HSDNA PdmeSl、ARTMpolymerase、dNTPpMD—China—LTR2为模板，分别扩增山羊和绵 Mixture、限制性内切酶、T4 羊内源性JSRV．LTR、绵羊外源性JSRV．LTR。 DNAligase、Marker DL2000等均购自宝生物工程(大连)有限公 IL1．1： 引物序列为：上游引物rpn 司；琼脂糖凝胶回收试剂盒、普通质粒小提试 剂盒及去内毒素质粒小提试剂盒购于omegaAAGGGIT，下游引物为：Xho