一组新的沙蚕蛋白酶同工酶的分离纯化与鉴定.pdfVIP

ISSN 中国生物化学与分子生物学报 2008 年 4 月 ( ) CN 　113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 24 4 :359～365 一组新的沙蚕蛋白酶同工酶的分离纯化与鉴定 1) 2) 1) 李 　奇 , 　王 　昭 , 　洪 　敏 ( 1) 吉林大学基础医学院生物化学教研室 ,吉林 长春 　130021 ; 2) 佳木斯大学医学院生物化学教研室 ,黑龙江 佳木斯 　154000) 摘要 　分离纯化一组新的沙蚕蛋白酶同工酶 ,并对其性质进行鉴定. 用硫酸铵盐析 、凝胶过滤层析 ( ) 和疏水层析技术从沙蚕中分离得到了沙蚕蛋白酶 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳 PAGE 、高效液相色谱 ( ) ( ) ( ) HPLC 、等电聚焦电泳 IEF 和质谱分析 MS 鉴定 ,发现沙蚕蛋白酶由3 个组分组成 ,均有纤溶活 性 ,其等电点为 35～45 ,分子量分别为29 24875 、29 00766 、28 95417 ,肽指纹图谱分析发现 ,它 们均为未知的新蛋白质 ,其中2 个组分结构相似 ,具有较高的同源性 ,与另 1 个有不同. 用抗原抗体 反应鉴定其免疫原性 ,发现 3 个组分中有 2 个组分具有相同的免疫原性 ,另 1 个组分与 2 者不同. 但 3 者具有相同的抗原决定簇 ,证明沙蚕蛋白酶由2 个同工酶组成. 以4 种专一性的抑制剂对其进 行抑制 ,检测酶的活性确定其酶学性质 ,发现其反应的适宜温度为 40 ℃～50 ℃、适宜pH 值为 8～9. 沙蚕蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶. 关键词 　沙蚕蛋白酶同工酶 ; 纯化 ; 鉴定 中图分类号 　Q55 Purification and Identification of Ne w Isoenzymes of Nereid Proteinase 1) 2) 1) LI Qi , WANG Zhao , HONG Min ( 1) Department of Biochemistry and Molecular Biology , School of Basic Medical Sciences , Jilin University , Changchun 130021 , Jilin , China ; 2) Department of Biochemistry , School of Medical Sciences , Jiamusi University ,Jiamusi 154000 , Heilongjiang , China) Abstract 　The native Nereid proteinase is a ser