SOD酶活测定中连苯三酚自氧化法的探讨.pdfVIP

维普资讯 每(3) 超 支鹕 ，酶活易 ： § I 日铀({)1 J— ／77 7／、 “／ SOD酶活测定 中连苯三酚 自氧化法的探讨 天 津 工 业微 生 物 所 郝饿 曹 — — — ～ 案提坤 夸擘9D 超氧化 物歧化酶 (Superoxidedismutase简 称 SOD)IEC1．15．1．1]首先 由 McCord T．M 等人发现存在于牛血 中，井被分离纯化…。其后许多学者利用猪血 ，弥猴桃果 实 ，各种微生物 等提取 SOD。近年来研究认为，SOD是一种重要的氧 自由基清除 剂，与机体的衰老，肿瘤，免疫性疾病及对逆环境的抗性有着密切的联系，成为当前酶类 中研究报遘最多的一种 。在医疗，保健上具有 良好的应用前景。 SOD所储化 的反应如下： nn 1 、} ． 一 ． 一 o ， + o， + 2H 。—-= H o + o， ． 其中oj一是耪氧 自由基，寿命很短很难楹f定 又因一些其它原因，导致 SOD 的酶活力测 定很难使用传统的 “底物减少”或 “产物 的增加 直接方法来测定。而采用一些 闻接方法来测 定。如化学发光法，细胞色素 C还原法，肾土腺素氧化拄，连苯三酚 自氧化i击，NBT法 等。其 中以连苯三酚 自氧化法较为简单 ，可行，有一定的准确性 l983年袁勤生 发表 该方法的研究文章．86年邹 冒林等 对此方法进行改进，其后相继有谢卫华 ，邓碧 玉 等人亦对该方法进行了研究。 我们在 微生物 SOD研究工作中，经 比较采用连苯三酚 自氧化珐铡定 SOD酶活力， 拄现一些操作上的问题 。为了更准确、更方便地进行测定，对此方法进行了研究探计，现 将结果报告于后。 实 验 部 分 一 、 试剂 与仪器 1．试剂 连苯三酚 (A．R)温州市瓯海化工试剂厂}三羟 甲基氯基 甲靛 (A．R)天 津市他学试剂公司；其它试剂均国产分析纯，SOD 自制 2．仪器；752C型紫外分 光光度计 (上海 第三分析仪器厂)微量移液器 MC5—25 型，冒产 。Gi~onP20进 口；超级恒温永浴；酸度计pHD—i型 二、操作 方法 l 连苯三酚 自氧化速率测定方法 在 10ml比色管中加入 pH8．0—8．450mM 的 Tris—HCi缓冲液，于 251=一28℃中于 热 20分钟，加入 2O微升 45ram 连苯三酚溶液 立即计时并摇匀，颤于 10ram 比色杯 内，·于 325nm 下每 30秒记下 O．D值。空 白以 lO撒升 IOmMHCl代替连苯三醯。按要求 自氧化速率应在 0．07o．D ／min左右 2．SOD粗酶披的话力测定 维普资讯 反应系统如下 试 剂 加人哥(m1】