哺乳动物细胞培养制备充足蛋白质药物取得的进展分析.pdfVIP

技创新与应用 2014 年第 10 期 科技 创新 哺乳动物细胞培养制备充足蛋白质药物取 得的进展分析 杨 茜 （北京义翘神州生物技术有限公司，北京 100 176） 摘 要：在目前制药领域，利用哺乳动物细胞制备充足蛋 质药物取得了积极进展，哺乳动物细胞制备的蛋 质药物以其具有与 天然蛋 质相似的特性而取得了重要应用。从蛋 质药物制造技术发展来看，考虑到哺乳动物细胞培养制备的蛋 质药物质量 较高，并且制备过程难度低、制备成本不高，由此决定了哺乳动物细胞培养制备充足蛋 质药物将在未来的制药领域取得全面发 展和应用。基于这一认识，我们应认真总结哺乳动物细胞培养制备充足蛋 质药物取得的进展，并深入探讨哺乳动物细胞培养制 备充足蛋 质药物技术的发展前景，做好哺乳动物细胞培养制备充足蛋 质药物的研制工作。 关键词：哺乳动物细胞；培养制备；充足蛋 质药物；进展分析 1 前言 重复序列。近年来新发现的强启动子如人编在蛋白(ubiquitin)C 基因 在近年生物制药发展中，利用哺乳动物细胞培养制备充足蛋白 启动子以及一些新构建的杂合启动子不仅具有更高的活性，而且具 质已经成为了重要的发展方向。研究表明，哺乳动物细胞培养制备 有更广阔的宿主细胞范围。 还是在蛋白质含量上，都达到了药 上述研究表明，不断地筛选改造载体上的表达结构元件是优化 的蛋白质，无论是在制备质量上， 用标准，并且在性能上也与天然蛋白质较为接近。基于这一优势和 表达载体、提高蛋白质药物在哺乳动物细胞中表达量的不变的方 特点，关于哺乳动物细胞制备充足蛋白质药物的研究得到了有效开 向。 展，并取得了积极的研究效果。结合目前关于哺乳动物细胞培养制 4 哺乳动物细胞制备充足蛋白质药物在生物制备过程中取得 备充足蛋白质药物的现状，该研究在重组细胞系、重组表达载体和 的进展 生物制备过程中取得了积极进展。 哺乳动物细胞大规模培养的工业化生产过程绝大多数是在生 2 哺乳动物细胞制备充足蛋白质药物在重组细胞系中取得的 物反应器中进行的单细胞悬浮式培养，反应罐的体积可达20 吨。为 进展 了节约成本，减少动物血清对产品的污染，现在主要采用无血清培 COS 细胞曾是进行外源基因表达研究中用途最广的宿主，但由 养基，目前有多家商业公司提供适用不同细胞株和不同生产工艺的 。目前哺 ，如 。 于其严重的贴壁作用，限制了大规模悬浮培养的 际应用 无血清培养基 UltraCulture ，ProCHO ，Pro293 等 乳动物细胞生产重组蛋白中，常用的细胞系有CHO 和HEK293 两 考虑到制药过程的现 需要，提高生物制备能力是保证蛋白质 大类细胞。CHO 是目前生物工程上广泛使用的细胞。该细胞属于成 药物制备取得 效的关键。从目前的研究过程来看，提高生物制备 纤维细胞，本身很少分泌内源蛋白，因此对目标蛋白分离纯化工作 能力的研究成果主要表现在以下几个方面： 十分有利，是表达复杂生物大分子的理想宿主。工业生产上应用较 4.1 培养方式可以为单细胞悬浮式培养。这样可以减少培养基， - 提高培养效果，降低培养过程成本。 多的是CHO-K1 细胞及CHO/dhfr 细胞，被广泛地用于重组DNA 蛋 。 4.2 反应罐的体积可以达到20 吨以上。现有的培养实验将反应 白的稳定表达生产 HEK293 细胞是转染腺病毒E1A 基因的人肾上 皮细胞系，它易于转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞 罐的体积设定在20 吨，并取得了良好的培养效果。因此在蛋白质制 株。利用瞬时基因表达方法，采用悬浮培养系统，可以快速、方便地 备过程