穿心莲内酯对白念珠菌生物膜分散的影响.pdfVIP

第 39卷第 17期 烹。I中ofChn；药esea条teral畚edcia VSoe1p．3t9em，bIsesure，201174 2014年9月 · 药理 · 穿心莲内酯对 白念珠菌生物膜分散的影响 施高翔 ，严园园 ，邵菁 ，陆克乔 ，张梦翔 一，汪天明1,2，汪长中 (1．安徽 中医药大学 中西医结合临床学院，安徽 合肥 230038； 2．安徽省中医药科学院 中西医结合研究所，安徽 合肥230038) [摘要] 随着真菌感染 日渐增多，白念珠菌的防治成为当前抗真菌感染的重点。该研究拟探讨中药单体穿心莲内酯 (AG)对 白念珠菌生物膜分散的影响。实验以微孔板结合医用导管片构建白念珠菌生物膜模型，分别通过XTI减低法和平板 法发现 1000，500，250mg·L AG能不同程度的影响白念珠菌生物膜分散细胞的活性 ；以扫描电镜观察导管片残余生物膜形 态结构，发现 1000，500，250mg·L AG能剂量依赖性的诱导白念珠菌生物膜的分散，且分散出的细胞以酵母相为主；实时荧 光定量PCR(qRT—PCR)法检测发现AG使HSP90表达上调，使UME6和PES1表达下调。该研究表明AG能一定程度的诱导 白念珠菌生物膜分散。 [关键词] 穿心莲内酯 ；白念珠菌；生物膜；分散 近年来，白念珠菌作为条件致病菌所引起的真 定研究院，批号 110797—201108)。25％戊二醛溶液 菌感染病例 日益增多，其致病性与形成生物膜密切 (国药集团化学试剂有限公司)；DMSO(博美生物科 相关 ，而后者是导致其高度耐药性和反复感染的重 技有限公司)；x1丫r(加拿大 BBI公司)；维生素 K 要原因，生物膜成熟周期包括黏附、形成微菌落、释 (美国Alexis公司)；PBS缓冲液 (本室配制)；Total 放胞外多聚物、形成成熟稳定的三维结构及后期生 RNA提取试剂 (日本 ToyoBo公司)；PCR试剂(日本 物膜细胞的分散(dispersion)等阶段，而从生物膜上 ToyoBo公司)。RPMI一1640液体培养基 (pH7．0± 分散下来的细胞易造成菌细胞定植至新的部位，造 0．1)，滤过灭菌，4℃保存备用。 成感染的播散…。 1．3 仪器 12孑L培养板 (美 国Coming公司)； 穿心莲 内酯 (andrographolide，AG)是从穿心莲 SpectraMaxM2e多功能酶标仪 (美国MolecularDe． 的全草或叶中分离的二萜类化合物，有较显著的抗 vices公司)；血细胞计数板(上海求精生化试剂仪器 细菌、真菌和肿瘤效果。本课题组在前期研究中发 有限公司)；ABI7000荧光定量 PCR仪(美 国生物应 现，中药单体 AG对 白念珠菌生物膜形成具有一定 用系统公司)。 的抑制作用，能明显抑制体外 白念珠菌的黏附以及介 2 方法 导白念珠菌凋亡_24。。为较系统地研究AG对 白念珠 2．1 白念珠菌液和导管片的制备 从4℃保存 菌生物膜整个发育周期的影响，故在前期研究基础上 的沙氏培养基上挑取 白念珠菌单个菌落，接种于 考察其对白念珠菌生物膜分散干预的效果。 RPMI．1640培养基，于37℃培养箱孵育，使 白念珠 1 材料 菌处于生长对数期后再次活化，血细胞计数板计数， 1．1 菌株 白念珠菌 CandidaalbicansSC5314，由 以RPMI一1640培养基稀 释浓度至 2×10。CFU · 第二军医大学药学院姜远英教授惠赠。 mL 备用。将医用聚氨酯导管(直径2．4mm)裁割 1．2 药物与试剂 穿心莲 内酯 (中国食品药品检 长为 1