腹腔内应用重组人血管内皮抑制素治疗艾氏腹水瘤的实验研究.pdfVIP

· 1218 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Sep；49(9) 腹腔内应用重组人血管内皮抑制素治疗艾氏腹水瘤的实验研究 彭登付 ，胡 冰 ，何义富 ，陈 健 ，袁 幸 ，王 伟 ，李 庆 摘要 目的 观察重组人血管 内皮抑制素对艾氏腹水瘤 管通透性来初步探讨其相关的作用机制，以便更好 (EAC)小鼠的治疗作用，并初步探讨其相关作用机制。方法 的指导临床用药 。 采用四甲基偶氮唑蓝 (MTr)法检测不同终浓度的重组人 血管内皮抑制素 (0、5、10、20、40 g／m1)对体外培养的 1 材料与方法 EAC细胞的抑制率；利用 EAC细胞建立腹水瘤小 鼠模型，将 1．1 主要的试验材料及仪器 10％胎牛血清、1640 54只腹水瘤小鼠随机分为3组：A组 (重组人血管内皮抑制 培养基 (美国Hyclone公司)；EAC细胞珠 (南京先 素8ms／kg，每 12h腹腔注射 1次)、B组 (重组人血管内皮 声药业细胞室赠送)；MTr、伊文思蓝(美国Sigma公 抑制素8ms／kg，每24h腹腔注射 1次)、C组即对照组 (生 理盐水0．2ml／只，每 12h腹腔注射 1次)。详细记录小 鼠 司)；清洁级 ICR小鼠，雄性，4—5周龄 ，16～18g购 腹水量、体重及生存期 ；酶联免疫吸附法 (ELISA)检测小鼠 于上海斯克实验动物有限公司；重组人血管内皮抑 腹水血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-2(MMP一 制素(商品名为恩度，15mg／支，南京先声药业)；小 2)；并通过尾静脉注射伊文思蓝染液间接反映微血管通透 鼠VEGF、MMP一2的酶联免疫吸附实验 (ELISA)试 性。结果 体外实验显示，不同浓度的重组人血管内皮抑制 剂盒 (美 国RD分装)；CO 恒温培养箱 (日本 素对EAC未见抑制作用；体内试验显示 ，重组人血管内皮抑 SANYO公司)；光学显微镜及其拍照系统 (日本 O- 制素组 (A组和B组)小鼠的体重、腹水量及腹水中VEGF和 LYMPUS公司)；酶标仪(美国Thermo公司)。 MMP-2浓度均低于对照组，生存 时间较对照组延长 (P 1．2 试验方法 0．05)；3组小鼠血管通透性、A组与B组之间的各项指标差 异无统计学意义 (P0．05)。结论 腹腔 内给药治疗小 鼠 1．2．1 体外细胞培养与MTY EAC细胞复苏后培 EAC疗效较好，其作用机制可能与抑制 VEGF及 MMP一2的 养于含 10％胎牛血清的 1640培养基中(内含 1％的 生成有关，提示重组人血管内皮抑制素在临床上治疗恶性腹 双抗：青霉素 100U／ml，链霉素 100U／m1)，于37 水有较好的应用前景。 ℃、5％CO，培养箱 中培养；取对数生长期细胞用 关键词 重组人血管内皮抑制素；艾氏腹水瘤；血管内皮生 0．2％台盼蓝染色鉴别细胞活力大于90％，配制成5 长因子；基质金属蛋 白酶_2 ×10个／ml的细胞悬液，接种于 96孔板，200 l／， 中图分类号 R735；R739．9 孔，5％CO、37℃培养 12h，加入不同终浓度的重组 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2014)09—1218—04 人血管内皮抑制素 (0、5、1O、20、40) ml及 1O ml的顺铂(