采用Fluo-3+AM-ester探针研究桃不同组织的Ca2%2b信号分布.pdfVIP

采用Fluo-3 鲁振华，王志强5， 牛良，崔国朝，刘淑娥 (中国农业科学院郑州果树研究所，国家桃葡萄改良中心，郑州450009) 摘要：钙作为植物最重要的矿质元素之一，在植物生理和生化活动中起重要作用。本研究采用激光扫描共 聚焦显微镜，以Fluo-3 主要分布于维管束，果实中多分布于细胞壁；Ca2+光信号相对强度在不同组织中差异不大，但叶柄中光 信号分布范围明显高于果肉组织，这可能与钙在不同组织中的功能有关。 AM-ester 关键词： 桃； ca”信号：激光扫描共聚焦显微镜；Fluo-3 et 物信号传导中的第二信使(Evansa1．，2005)，在植物应对环境刺激时，胞质内钙离子浓 度的改变是一重要的网络信号。同时钙在果实耐贮性以及品质方面有重要作用，如果实的钙 含量的提高有利于维持细胞壁的强度和膜的完整性，保持果实硬度，提高果实品质等(朱竹 et 等，2010：Liueta1．，2009：Manganarisa1．，2005)。 Confocal 激光扫描共聚焦显微镜(LaserScanning MicroscopeLSCM)是20世纪80 年代发展起来的细胞生物学分析仪，与传统光学显微镜相比，它具有更高的分率和清晰度， 实现多重光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点。利用光探针标记，LSCM可以 对细胞内微细结构和离子的动态变化进行定性、定量、定时和定位分析，为我们对组织细胞 eta1．，2005)。Fluo-3AM-east是一种长波钙光探针， 的研究提供了新的手段(Claxton 它的吸收和发射峰为506和526um，能被488nm的激光激发，若以游离配体形式存在时 几乎是非光性的，但是当它与钙离子结合后 et eta1．，2000)，在 作为研究Ca2+信号的光染料(Perez—Terzica1．，1997：Walczysko 动物组织中应用较多，目前还未见在桃组织，特别在桃果实组织研究中有报道。本研究中， 我们以Fluo-3 对果实品质的影响，合理喷施钙元素提供依据。 l材料、方法 1．1材料 材料取自中国农业科学院郑州果树研究所桃育种课题组品种资源圃，以油桃(Prunus persica 每10天喷1．0％CaCIz。我们选取成熟果实和同时期的叶柄用来分析钙离子信号。 1．2方法 1．2．1材料制备及探针杂交采用徒手切片法，用须刀片将果实切取约Imm的厚度。 l u u USA)50u p DMSO(1IIIM)，15 g 将Fluo一3一AM(Blotiumg溶于45 l／支分装，冻存。25 基金项目：公益性行业(农业)科研专项(200903044) for 5通讯作者。Author ·267· Pluronic l F-127溶于75B II 1Pluoronic 将ImMFluo一3-AM稀释成lOuM，每ml染液中再加入5 F127。具体操作步如 下： (3)用200IJl的 (1)将切取组织放入1．5ml离心管；(2)用HEPES缓冲液漂洗2次； Fluo-3 AM—ester(10u 在载玻片上进行观察。 SP5激光共聚焦扫描显微 1．2．2图采集及分