白藜芦醇抑制TGF-β1诱导的肾小球足细胞转分化研究.pdfVIP

中华中医药学会第二十六次肾病分会学术交流会议 该项研究显示，TGF—B1刺激足细胞72h，可使透过单层孔隔膜的完整性；而足细胞凋亡则可直接影响足细胞密度而 足细胞的蛋白滤过量显著增加。’mF—B1对足细胞表型和骨破坏肾小球滤过屏障的完整性。 架系统蛋白的影响可能导致足细胞足突融合，从而破坏了裂 参考文献：略 白藜芦醇抑制TG 1诱导的肾小球足细胞转分化 F—p 的研究 杨汝春朱晓玲张华琴李卫冬 杭州市中医院(浙江中医药大学附属广兴医院) 目的研究白藜芦醇(Resveratml)对TGF—Bl诱导的肾 (CeU Cnlz)。 小球足细胞转分化的影响，为白藜芦醇在肾脏病防治领域的 signaling，24E10)，ECL显色剂(Santa 应用提供科学依据。方法体外分化条件下培养小鼠足细胞 2．细胞培养及鉴定 永生化温度敏感小鼠足细胞株由Mundel教授惠赠。将复 10d，用rIGF—B1诱导作为研究模型，不同浓度白藜芦醇干 预。分别采用免疫细胞化学、流式细胞术、westem-blotting技 术等检测足细胞表型蛋白分子和a一平滑肌肌动(仪一smootll清的RPMll640培养基培养，置33℃、5％c02培养箱中孵育， muscle—actin，0【一SMA)表达。用蛋白滤过试验检测单层足细让细胞增殖传代。诱导分化时，将培养液换成不含1一IFN的 胞的蛋白滤过功能。结果TGF—Bl诱导的足细胞E—cadherin、培养基培养，并转移至37℃、5％c02培养箱中培养2周，免疫 P—cadh商n、z0—1和NEPHl等分子的蛋白表达显著降低，而 荧光技术检测neph—n和podocin的表达鉴定足细胞。 平滑肌肌动蛋白仪一sMA蛋白表达水平显著增高。白藜芦醇 3．实验分组及干预 干预组E_ead}Iedn、P—cadh谢n、NEPHl蛋白表达较模型组显实验分为正常组、模型组和白藜芦醇干预组，干预组分别 著上调；而0l—SMA表达显著降低。白藜芦醇干预可显著降低加入白藜芦醇至2pM、5斗M，30min后，模型组与干预组中均 透过单层足细胞的蛋白滤过量。结论：白藜芦醇显著抑制 加入TGF-pl至5n咖l，继续培养72h，正常组常规培养。 TGF—Bl诱导的足细胞表型异常可能是其维持肾小球滤过屏 4．免疫荧光技术检测podocin、nep¨n 障的完整性，降低蛋白尿的重要机制。 将小鼠足细胞接种于明胶处理的预置玻片上，待细胞长 至80％融合时，用TGF—Bl刺激48h。取出玻片，PBs洗3次； 肾小球足细胞(podocyte)损伤是决定蛋白尿发生的关键 x一 因素(1—2)。最新研究表明，足细胞在病理损伤因素刺激下晾干后加丙酮固定5min，风干；PBS洗3次，O．3％％ton 可发生上皮细胞向间充质细胞的逆转，导致细胞表型去分化， 从而失去复杂的足细胞形态学结构和高度特异性功能，最终 损害了肾小球滤过屏障的完整性而引发蛋白尿(3—4)。抑制 足细胞逆向分化，维持足细胞正常形态对于阻断肾病进展异 核染液染色6—7min；PBs洗3次，晾干后封片。 常关键。但目前尚无针对足细胞表型去分化进行干预的措施。 5．流式细胞术检测E—cadherin表达 近年来研究显示，白藜芦醇具有显著降低蛋自尿和肾保护的 用PBS洗细胞两次，胰酶／EDTA消化并收集细胞；4％多 功能(5)。目前尚无白藜芦醇对足细胞的干预作用的相关研 1诱导足细胞 究，本项研究将在体外观察白藜芦醇对TGF-B 转分化的抑制作用。