甘草与反药配伍对P-糖蛋白影响与相关研究及配伍禁忌对口服药物肠道吸收机制与探讨.pdfVIP

甘草与反药配伍对P一糖蛋白影响的相关研 究及配伍禁忌对口服药物肠道吸收机制的 探讨 博士研究生：孙亚彬 指导教师：李国锋教授 摘要 背景和目的 cassette)转运 体超家族的能量依赖性膜蛋白，分子量为170kDa，可发挥外排泵作用，将细胞 内的化合物逆浓度梯度转运至胞外，从而降低细胞内的药物浓度。P．gP除在肿 瘤细胞中高度表达外，在正常机体组织和器官如肝脏、肾脏、胎盘、大脑、睾 丸及肠刷状缘膜等部位均有高水平的表达。存在于肠上皮细胞刷状缘膜中的 P．gP能将药物从浆膜侧泵回至粘膜侧而进入肠腔排出，导致药物透膜吸收减少， 血药浓度降低。因此，受肠粘膜P．gP调控的经肠道吸收药物可以通过抑制肠粘 膜P．gP的活性而增加吸收，提高生物利用度。现已证实，许多药物均为肠粘膜 P．gP的抑制剂，例如维拉帕米、环胞菌素A、奎尼丁、一些表面活性剂等。 中药十八反是中医界沿袭数千年的用药禁忌。有研究表明，甘草与反药合 用前后对细胞色素P450具有不同的调控作用。令人感兴趣的是P．gP的底物特异 性很大程度上与细胞色素P450同工酶(CYP3AI．3)相似，二者有很多重叠的底 物，如利福平、利多卡因、地高辛以及环孢菌素等。那么，这些反药对合用前 后也有可能对肠粘膜P．gP产生不同的调节作用，这可能是反药合用引起临床上 产生毒性的原因。文献检索表明，目前国内外尚未见由探讨肠粘膜P．gP的表达 中文摘要 同中药配伍合理性之间的研究报告，因此探讨中药反药对合用后毒性增加是否 同P．gP表达的改变等研究具有较高的学术价值。 本课题选择十八反药对中的甘草，甘遂，海藻，京大戟作为模型药进行研 究。参考2010年版中国药典》对所选中药材进行质量控制后，中药材按传统 方法进行煎煮，制备甘草水提液，反药水提液及甘草反药合煎水提液，甘草反 药合并水提液。选择典型的P．gP抑制剂维拉帕米为阳性对照药物，以生理盐水 为阴性对照药物。将中药水提液，维拉帕米，生理盐水分别对Wistar大鼠灌胃 chamber)，Real．timePCR法，在体Insitu实 造模，利用体外扩散池法(Ussing 验法，分析甘草与反药合用前后对大鼠肠粘膜P—gP表达的影响。实验中，将P—gP 转运方式的标志物进行检测。Ussing 见光范围的荧光，故应用荧光分光光度计进行检测，检测灵敏度高。实验成功 建立了荧光分光光度计对肠粘膜透过液中R123和CF检测的方法学，选取了灌 胃的最佳浓度及能够反应肠道吸收机制的最佳肠段。Insitu体内实验中，应用 的检测能间接地说明甘草反药合用前后对P．gP调控的规律性。基因水平实验中， 选择mdrla为目的基因，各个组织中表达量相对恒定的B．actin为内参基因分析 造模大鼠不同区段肠道的P．gp表达情况，阐明甘草反药合用引起毒性增加的可 能作用机制。 内容和结果 中药根据不同产地、不同炮制方法，质量存在很大差别，因此要首先对实 验中所用的甘草，甘遂，海藻，京大戟进行质量控制。参考2010年版《中国药 典》含量测定的方法，分别选择甘草酸铵，甘草苷，丹酚酸B(首次从京大戟中 150mm， 分离得到)，大戟二烯醇为对照品。选择InertsilODS．SPCI8柱(4．6X 5IIm)为色谱柱：柱温：4012；流动相：A为乙腈，B为0．05％磷酸水溶液。 其中甘草酸铵，甘草苷用于甘草水提液的含量测定：波长为237nm；采取梯度 洗脱。大戟二烯醇用于甘遂的含量测定：流动相：A为乙腈，B为O．05％磷酸水 ¨ 博士学位论文 于京大戟含量测定：波长为210nm；采用梯度系统。甘草酸铵标准品，甘草苷 标准品，丹酚酸B标准品，大戟二烯醇标准品(A用于甘遂水提液检测，B用于 京大戟水提液检测)在各自的色谱条件下，重现性良好，各自保留时间