肝量状细胞与基因差异表达以及抑制T细胞功能与肝细胞癌转移与实验研究.pdf

博士论文 中文摘要 大鼠肝星状细胞的基因差异表达以及抑制T细胞功能与肝细胞 癌转移的实验研究 中文摘要 肝细胞肝癌(hepatocellularcarcmoma，HCC)是发病率最高的肿瘤之一，细胞 分子生物学的迅猛发展加深了人们对HCC形成机制的理解，目前普遍认为HCC 的发生是由于在肝炎病毒和其它致癌因素的作用下，肝细胞发生了基因突变或表 观遗传改变而导致癌变。然而这些认识却未能给如何控制HCC带来突破性的进 展，原因之一是以往对HCC的研究大多只把重点放在肝细胞恶变上，而忽视了 间质细胞在其中的重要作用。恶性肿瘤基因和细胞生物学的研究表明，实质细胞 和间质细胞的共同作用是癌症形成和发展的重要基础。间质细胞包括肌成纤维细 胞、炎症细胞、内皮细胞等，通过细胞因子、趋化因子、细胞外基质(extracellular matrix，ECM)或细胞间的直接接触等途径和实质细胞相互作用，与实质细胞癌 变、肿瘤中新生血管及结缔组织生成、肿瘤免疫等有关，在肿瘤发生发展中扮演 重要角色。 stellate 肝星状细胞(hepaticcell，HSC)是肝脏主要的间质细胞之一，HSC又 被称为Ito细胞、贮脂细胞、窦周细胞，呈梭形或多边形，位于肝窦内皮与肝细 胞之间的Disse间隙内，其特点是具有长的分枝状的细胞突起，并通过这些细胞 突起与肝窦内皮细胞和肝细胞形成紧密接触，为HSC和肝细胞的相互作用奠定 了生理解剖学基础。正常时HSC占肝脏固有细胞总数80／o-12％，作为储脂细胞 主要参与体内维生素A的代谢，处于静止状态，不表达a．平滑肌肌动蛋白 muscle m．smoothactin，0【．SMA)、低增殖活性、低合成胶原能力。在肝炎病毒和 其它肝损因素的作用下，HSC可被激活，脂质渐消失，并发生形态学改变，转 化为肌成纤维细胞。HSC活化的主要标志为细胞增殖、表达a-SMA、异常分泌 一些细胞因子、趋化因子以及合成以I、m型胶原为主的多种ECM蛋白，结果 造成肝脏纤维化并进一步发展为肝硬化。近来研究提示HSC活化在HCC的发生、 发展和转移中可能起了至关重要的作用，然而具体的作用机制仍然不详。 目前认为，HSC基本的非免疫学功能包括维生素A平衡维持、肝纤维化和 调节肝血流。HSC的深入研究证明其表达模式识别受体包括调节免疫应答所需 要的Toll样受体(Toll．1ikereceptors，TLRs)，共刺激分子和细胞因子，提示其潜 3 博士论文 中文摘要 在的免疫学作用。近来大多研究证明HSC代表强大的APC，诱导CD．1、MHC．I 和MHC．II限制性T细胞激活和介导抗感染免疫。此外，新的研究提示HSC在 维甲酸(retinoicacid，RA)介导T细胞分化中起重要作用。而活化HSC能使T细 胞凋亡，行使肝内的免疫保护反应，有利于肝内免疫平衡。HSC在HCC内的免 疫学功能如何，与肝癌的复发转移是否相联系，目前尚无相关报道。 本课题首先通过比较大鼠肝癌细胞诱导活化的HSC与培养活化HSC间基因 表达差异，证实了肝癌相关活化的HSC功能是不同于培养活化的HSC，为进一 步研究HCC内HSC的免疫抑制与肝癌侵袭转移之间的关系提供理论基础；通过 的关系提供实验平台；通过分离纯化大鼠HCC内的HSC和大鼠脾T细胞，在 体外进行相互作用研究，并探索HSC对T细胞的功能抑制与肝癌侵袭、转移的 可能机制，为体内研究和干预研究提供实验基础，进而为肝癌转移的免疫治疗提 供新的靶点。 第一部分 大鼠肝癌细胞诱导活化和体外培养活化HSC的基因差异表达 本部分实验目的是为了解肝癌内HSC和正常肝HSC有无区别，为后续的研 medium， 究提供理论基础，比较了大鼠HCC细胞株C5F条件培养基(conditioned CM)诱导的HSC和体外培养活化HSC的基因表达。通过链霉蛋白酶和胶原